HIS標(biao)簽蛋(dan)白(bai)的(de)使用(yong)主(zhu)要(yao)涉(she)及其純化、檢測(ce)和(he)應用等(deng)方面(mian)

HIS標簽(qian)蛋(dan)白(bai)，即通(tong)過(guo)基(ji)因工程(cheng)方法(fa)在(zai)目標蛋(dan)白(bai)的(de)N端或C端融(rong)合(he)壹段(duan)由(you)六(liu)個(ge)或更多連續組氨酸殘(can)基(ji)組成(cheng)的(de)短肽(tai)序(xu)列(lie)（通(tong)常(chang)為(wei)His6標(biao)簽(qian)）而得到(dao)的(de)重組蛋(dan)白(bai)，在生物醫學(xue)研究中(zhong)具有廣(guang)泛應用。其(qi)保(bao)存情況(kuang)對於(yu)確保(bao)蛋(dan)白(bai)的(de)穩定(ding)性和(he)活性(xing)至關重要(yao)。  

保(bao)存溫(wen)度：通(tong)常(chang)需(xu)要(yao)在(zai)-20℃或更低的(de)溫(wen)度下(xia)保(bao)存，以避免(mian)蛋(dan)白(bai)降解(jie)和(he)失活。壹(yi)些試劑(ji)盒(he)或產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)可(ke)能會指定(ding)具體的(de)保(bao)存溫(wen)度，如(ru)4℃或室(shi)溫(wen)，但長期保(bao)存時，-20℃是(shi)更(geng)常(chang)見(jian)的(de)選(xuan)擇。  

避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)：反(fan)復(fu)凍融(rong)會導致(zhi)蛋(dan)白(bai)變性或降解(jie)，從而(er)降(jiang)低其活性(xing)。因此，在保(bao)存和(he)使用(yong)時(shi)，應盡量避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)。如(ru)果(guo)需要(yao)多次(ci)使用(yong)，可以(yi)將蛋(dan)白(bai)分裝成小管(guan)，每(mei)次(ci)取用(yong)時只(zhi)解(jie)凍壹(yi)小管(guan)。  

添(tian)加(jia)保(bao)護(hu)劑：在(zai)某(mou)些(xie)情況(kuang)下(xia)，為了保(bao)持穩(wen)定(ding)性(xing)和(he)活性(xing)，可以在(zai)保(bao)存液(ye)中(zhong)添(tian)加(jia)壹(yi)些(xie)保(bao)護(hu)劑，如(ru)甘油、蔗(zhe)糖或牛血清白蛋(dan)白(bai)（BSA）等。  

標簽與(yu)記錄：為每支HIS標(biao)簽(qian)蛋(dan)白(bai)做(zuo)好標簽(qian)，詳細(xi)記錄蛋(dan)白(bai)的(de)名稱、規格(ge)、批號、生產(chan)日期、有(you)效期(qi)等(deng)信(xin)息。同(tong)時(shi)，建立蛋(dan)白(bai)使用記錄表，記錄每次(ci)使用(yong)蛋(dan)白(bai)的(de)時間、用(yong)量、實(shi)驗目的(de)等，以(yi)便(bian)追(zhui)蹤和(he)回溯(su)。  

HIS標(biao)簽(qian)蛋(dan)白(bai)的(de)使用(yong)主(zhu)要(yao)涉(she)及其純化、檢測(ce)和(he)應用等(deng)方面(mian)。  

純(chun)化：可以通(tong)過(guo)金屬(shu)離(li)子親(qin)和(he)層析(xi)（IMAC）進(jin)行純(chun)化。這(zhe)種方法利用HIS標簽與特定金(jin)屬離(li)子（如鎳(nie)Ni2+、鈷(gu)Co2+等(deng)）之(zhi)間的(de)親(qin)和(he)作用(yong)來純化帶有HIS標(biao)簽的(de)蛋(dan)白(bai)。純化過(guo)程中(zhong)，通(tong)常(chang)需(xu)要(yao)使(shi)用含有咪(mi)唑(zuo)的(de)洗(xi)脫(tuo)液(ye)來競爭(zheng)性(xing)地洗(xi)脫(tuo)結(jie)合(he)在層(ceng)析(xi)柱(zhu)上(shang)的(de)。  

檢測(ce)：可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)多種方法進(jin)行檢(jian)測(ce)，如(ru)Westernblot、免(mian)疫熒(ying)光、ELISA等。這(zhe)些(xie)方法通(tong)常(chang)利(li)用(yong)能(neng)夠特異性(xing)識(shi)別(bie)HIS標(biao)簽(qian)的(de)抗體(ti)來檢測(ce)表(biao)達(da)、細(xi)胞內定(ding)位(wei)以及(ji)純化效果(guo)等。  

應用：生(sheng)物醫學(xue)研究中(zhong)具有廣(guang)泛應用，如(ru)蛋(dan)白(bai)質(zhi)相互(hu)作(zuo)用研究、酶活性(xing)分析(xi)、結(jie)構(gou)生物(wu)學(xue)研究以及(ji)診(zhen)斷和(he)治(zhi)療(liao)等(deng)。通(tong)過(guo)融合(he)HIS標簽(qian)，可以方便(bian)地(di)純(chun)化和(he)檢測(ce)目(mu)標(biao)蛋(dan)白(bai)，從而(er)推動(dong)相關研究的(de)發展(zhan)。