PKC η 重(zhong)組(zu)兔單(dan)抗(kang)：如何(he)成(cheng)為精(jing)準(zhun)探索(suo)細胞信(xin)號傳(chuan)導(dao)的(de)關(guan)鍵(jian)工(gong)具(ju)？

壹、為何(he)傳(chuan)統抗(kang)體在(zai)PKC η研究中(zhong)面臨(lin)局限性？

在(zai)重組(zu)兔單(dan)抗(kang)技(ji)術成熟(shu)之前，科(ke)研人員(yuan)主(zhu)要依賴傳統多克隆抗(kang)體或鼠(shu)源單(dan)克隆抗(kang)體進(jin)行PKC η的(de)研究。這(zhe)兩(liang)種技(ji)術路(lu)線(xian)均存在固有缺陷(xian)，制約(yue)了研究的(de)深(shen)度與準(zhun)確(que)性。

多(duo)克隆抗(kang)體通(tong)常(chang)由(you)免(mian)疫動(dong)物(wu)血(xue)清純化(hua)獲得(de)，其本質是(shi)針對(dui)抗(kang)原多個表(biao)位的(de)抗(kang)體混(hun)合物(wu)。這(zhe)種特(te)性導(dao)致其交(jiao)叉反應(ying)性較(jiao)高。PKC家(jia)族(zu)成員間(jian)，尤其在催(cui)化(hua)結構(gou)域(yu)，存(cun)在(zai)較(jiao)高的(de)序列(lie)同源性。因(yin)此，使用多(duo)克隆抗(kang)體檢測PKC η時(shi)，極(ji)易與其他PKC亞(ya)型(xing)（如PKC δ, PKC ε）發(fa)生交(jiao)叉反應(ying)，導(dao)致免(mian)疫印(yin)跡(ji)（Western Blot）出(chu)現(xian)非特(te)異性條(tiao)帶(dai)，或免(mian)疫組(zu)織化(hua)學(xue)（IHC）染色(se)背(bei)景(jing)過高、定位模(mo)糊(hu)，實(shi)驗結果的信(xin)噪比(bi)和特(te)異性難(nan)以保證。

傳統的鼠(shu)源單(dan)克隆抗(kang)體通(tong)過(guo)雜交(jiao)瘤(liu)技(ji)術制備(bei)，雖(sui)然解(jie)決(jue)了批次間(jian)差異(yi)的問題(ti)，但其識別表(biao)位的(de)多樣(yang)性受限於(yu)小(xiao)鼠(shu)免(mian)疫系(xi)統。對(dui)於(yu)像(xiang)PKC η這(zhe)樣(yang)高度保守的蛋白(bai)，可(ke)能難(nan)以篩(shai)選到(dao)針對(dui)其獨特(te)可變區、且(qie)親和(he)力(li)高的(de)單(dan)克隆抗(kang)體。此(ci)外，鼠(shu)源抗(kang)體在(zai)應(ying)用於(yu)人(ren)源(yuan)組(zu)織樣(yang)本時(shi)，可能因(yin)種屬(shu)差異導(dao)致靈敏度不足或非特(te)異性結合。這(zhe)些(xie)局(ju)限性使(shi)得(de)對(dui)PKC η在復雜生理(li)病(bing)理(li)過(guo)程中的細(xi)微(wei)表(biao)達(da)變化、亞(ya)細(xi)胞定位遷(qian)移等精(jing)細事件(jian)的觀測，變得(de)困(kun)難(nan)重(zhong)重。

二、重組(zu)兔單(dan)抗(kang)技(ji)術如何(he)實(shi)現(xian)性能的(de)超越？

重(zhong)組(zu)兔單(dan)克隆抗(kang)體技(ji)術的出(chu)現(xian)，標誌著抗(kang)體工(gong)程(cheng)領域的壹次重(zhong)大(da)革新(xin)。該技(ji)術巧(qiao)妙地(di)結合了兔免(mian)疫系(xi)統與噬(shi)菌體(ti)展(zhan)示(shi)或單(dan)B細胞克隆等重(zhong)組(zu)DNA技(ji)術的優(you)勢，為生(sheng)產(chan)高性能研究抗(kang)體開辟(pi)了新路(lu)徑(jing)。

從(cong)原理(li)上(shang)看(kan)，該技(ji)術首先(xian)利用高度純化的PKC η抗(kang)原（如特(te)定功能結構(gou)域(yu)的(de)重(zhong)組(zu)蛋白(bai)或多肽）免(mian)疫兔(tu)。兔(tu)子(zi)擁有(you)更(geng)豐富(fu)的抗(kang)體基(ji)因(yin)庫(ku)和更(geng)強的產(chan)生高親和(he)力(li)抗(kang)體的(de)能力(li)，尤(you)其是針對(dui)保守(shou)蛋白(bai)。隨(sui)後，從(cong)免(mian)疫兔(tu)的(de)脾(pi)臟或外周(zhou)血(xue)中分離(li)B淋巴細(xi)胞，通(tong)過(guo)分子克隆技(ji)術獲取其抗(kang)體輕(qing)鏈和(he)重(zhong)鏈的(de)可(ke)變區基因。這(zhe)些(xie)基(ji)因被克隆至(zhi)表(biao)達(da)載(zai)體，在哺乳動(dong)物(wu)細胞（如(ru)HEK293細(xi)胞）中(zhong)進(jin)行重(zhong)組(zu)表(biao)達(da)與生(sheng)產。這(zhe)壹過(guo)程(cheng)摒棄了傳統的雜交(jiao)瘤(liu)技(ji)術，實(shi)現(xian)了全流(liu)程(cheng)的可控(kong)化。

其核(he)心優(you)勢體現(xian)在三個(ge)方(fang)面：首先，特(te)異性與親和(he)力(li)。得(de)益(yi)於(yu)兔(tu)免(mian)疫系(xi)統的特(te)性以(yi)及(ji)重(zhong)組(zu)技(ji)術允(yun)許(xu)對(dui)候選抗(kang)體進(jin)行嚴(yan)格的(de)篩(shai)選(xuan)與驗(yan)證，最(zui)終(zhong)獲(huo)得(de)的(de)抗(kang)體能夠(gou)精(jing)準(zhun)識別PKC η的抗(kang)原表(biao)位，大(da)程(cheng)度地避免(mian)與其他PKC亞(ya)型(xing)的交(jiao)叉反應(ying)。其次，高批(pi)次壹致性。重(zhong)組(zu)抗(kang)體的(de)生(sheng)產基於(yu)固定的DNA序列(lie)，不(bu)同生產批次間(jian)性能壹致，確(que)保(bao)了實(shi)驗結果的長(chang)期(qi)可比(bi)性與可(ke)重復性，這(zhe)對(dui)長(chang)期(qi)研究項(xiang)目至(zhi)關(guan)重(zhong)要(yao)。最(zui)後，應(ying)用的(de)廣(guang)泛性與靈活性。重(zhong)組(zu)兔單(dan)抗(kang)在多(duo)種實(shi)驗平臺(tai)中均表(biao)現(xian)出色(se)，包(bao)括但(dan)不限於(yu)Western Blot、免(mian)疫沈(chen)澱(dian)（IP）、染色(se)質(zhi)免(mian)疫沈(chen)澱(dian)（ChIP）、免(mian)疫熒光（IF）以(yi)及(ji)免(mian)疫組(zu)織化(hua)學(xue)等。其高親和(he)力(li)使(shi)得(de)在(zai)石蠟包(bao)埋組(zu)織等挑戰性樣(yang)本中也(ye)能實(shi)現(xian)清晰的(de)信號檢測。

三、PKC η重(zhong)組(zu)兔單(dan)抗(kang)在哪(na)些(xie)前(qian)沿研究方(fang)向(xiang)中扮演(yan)關(guan)鍵(jian)角(jiao)色(se)？

憑(ping)借(jie)其性能，PKC η重(zhong)組(zu)兔單(dan)抗(kang)已(yi)成(cheng)為深(shen)入(ru)探(tan)索(suo)該蛋白(bai)生(sheng)物學功能的(de)“利器(qi)"，在多(duo)個前(qian)沿研究領(ling)域(yu)發(fa)揮(hui)著不(bu)可替(ti)代的作用。

在(zai)腫瘤(liu)生(sheng)物(wu)學(xue)研究中(zhong)，PKC η被發(fa)現(xian)在多(duo)種上(shang)皮(pi)源性腫(zhong)瘤(liu)中(zhong)表(biao)達(da)異(yi)常，其功能具(ju)有細(xi)胞類(lei)型(xing)和上(shang)下(xia)文(wen)依賴性，可(ke)能扮演(yan)癌基因(yin)或抑癌基因(yin)的(de)角(jiao)色(se)。利用高特(te)異性的(de)重組(zu)兔單(dan)抗(kang)，研究人(ren)員(yuan)能夠(gou)精(jing)確(que)評(ping)估PKC η在不同腫瘤(liu)分期(qi)、分級組(zu)織切(qie)片(pian)中(zhong)的(de)表(biao)達(da)水(shui)平與亞(ya)細(xi)胞定位（如(ru)胞質(zhi)、胞核(he)或膜轉位），並(bing)將其與患(huan)者臨(lin)床(chuang)病理(li)特(te)征(zheng)及(ji)預(yu)後進行關(guan)聯分析，為探(tan)索(suo)其作為潛(qian)在(zai)生(sheng)物(wu)標誌物或治療靶點提(ti)供(gong)紮(zha)實(shi)的數(shu)據(ju)基礎(chu)。

在細胞信(xin)號傳(chuan)導(dao)網(wang)絡解(jie)析方面，PKC η是多種受體下(xia)遊(you)通路(lu)（如(ru)GPCR、RTK通路(lu)）的(de)關(guan)鍵(jian)節(jie)點(dian)。通過(guo)免(mian)疫沈(chen)澱(dian)結合質譜(pu)分析（IP-MS），使用該抗(kang)體可(ke)高效(xiao)地(di)釣(diao)取與PKC η相(xiang)互作用的(de)蛋白(bai)質(zhi)復合物(wu)，從(cong)而繪(hui)制(zhi)其動態(tai)的(de)相(xiang)互作用圖譜(pu)，揭(jie)示其在特(te)定信號通(tong)路(lu)中(zhong)的全(quan)新調(tiao)控(kong)機(ji)制(zhi)。同時(shi)，在共(gong)聚(ju)焦顯微鏡下(xia)進(jin)行免(mian)疫熒光雙(shuang)標(biao)實(shi)驗，可以(yi)實(shi)時(shi)觀測在(zai)生(sheng)長(chang)因子刺(ci)激、藥(yao)物(wu)處(chu)理(li)或應(ying)激條(tiao)件(jian)下(xia)，PKC η在(zai)細(xi)胞內(nei)的(de)時(shi)空動態變化，直觀揭(jie)示其激活與失(shi)活過(guo)程。

在神(shen)經(jing)系統與免(mian)疫調(tiao)節(jie)研究中(zhong)，PKC η在(zai)中樞(shu)神(shen)經(jing)系統及(ji)特(te)定免(mian)疫細(xi)胞亞(ya)群中(zhong)的(de)功能逐(zhu)漸被揭(jie)示。高靈敏度的重組(zu)抗(kang)體使(shi)得(de)在(zai)腦組(zu)織切(qie)片(pian)或原代免(mian)疫細(xi)胞等樣(yang)本稀(xi)少(shao)、抗(kang)原含量(liang)低(di)的場(chang)景(jing)中，對(dui)PKC η進行精(jing)確(que)定量(liang)和(he)定位成(cheng)為可(ke)能，有(you)助於(yu)闡明(ming)其在神(shen)經(jing)發(fa)育(yu)、突(tu)觸(chu)可塑性以(yi)及(ji)免(mian)疫細(xi)胞激活與分化中的具(ju)體作用。

四(si)、提(ti)供(gong)PKC eta 重(zhong)組(zu)兔單(dan)抗(kang)的廠(chang)商有(you)哪(na)些(xie)？

杭(hang)州(zhou)斯達(da)特(te)生物(wu)科技(ji)有限公司自(zi)主研發(fa)的"PKC eta重(zhong)組(zu)兔單(dan)克隆抗(kang)體"（產(chan)品(pin)名：PKC eta Recombinant Rabbit mAb (S-1053-35)，貨號：S0B0790），是(shi)壹款具(ju)有(you)高特(te)異性、優(you)異靈敏度及(ji)穩(wen)定性的(de)新型蛋白(bai)激酶(mei)C檢測工具。該產品(pin)采用重(zhong)組(zu)兔單(dan)克隆抗(kang)體技(ji)術開發(fa)，經(jing)Western Blot（WB）、免(mian)疫熒光（IF）及(ji)免(mian)疫沈(chen)澱(dian)（IP）等多(duo)種技(ji)術平臺(tai)嚴(yan)格驗(yan)證，在上(shang)皮(pi)分化調(tiao)控(kong)、皮(pi)膚屏障(zhang)功能及(ji)炎(yan)癥反應(ying)等領(ling)域(yu)具(ju)有重(zhong)要(yao)研究價值(zhi)。

杭州(zhou)斯達(da)特(te)誌在為全(quan)球(qiu)生(sheng)命(ming)科學行業提(ti)供(gong)優(you)質(zhi)的(de)抗(kang)體、蛋白(bai)、試劑(ji)盒(he)等產(chan)品(pin)及(ji)研發(fa)服務。依托多個(ge)開發(fa)平臺(tai)：重組(zu)兔單(dan)抗(kang)、重組(zu)鼠(shu)單(dan)抗(kang)、快速(su)鼠(shu)單(dan)抗(kang)、重組(zu)蛋白(bai)開發(fa)平臺(tai)（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）,已(yi)正式(shi)通(tong)過(guo)歐(ou)盟(meng)98/79/EC認證、ISO9001認證、ISO13485。

PKC η 重組(zu)兔單(dan)抗(kang)：如何(he)成(cheng)為精(jing)準(zhun)探索(suo)細胞信(xin)號傳(chuan)導(dao)的(de)關(guan)鍵(jian)工(gong)具(ju)？