流(liu)式(shi)抗(kang)體(ti)封(feng)閉：如(ru)何有效(xiao)避(bi)免(mian)實驗(yan)中(zhong)的(de)假陽性結果？

壹(yi)、流(liu)式(shi)抗(kang)體(ti)的(de)基(ji)本(ben)結構(gou)及(ji)其功(gong)能(neng)特點是(shi)什(shen)麽？

流(liu)式(shi)細(xi)胞術中(zhong)所(suo)使用(yong)的(de)抗體，無(wu)論是(shi)單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)還是(shi)多克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)，其基(ji)本(ben)結構(gou)均(jun)由Fab段(duan)和Fc段(duan)兩個(ge)功(gong)能(neng)區域(yu)組成。Fab段作(zuo)為(wei)抗原結(jie)合(he)區域(yu)，負(fu)責特異性識別並結(jie)合(he)細(xi)胞表面(mian)的(de)靶(ba)抗原，這(zhe)壹(yi)特性是(shi)流(liu)式(shi)檢(jian)測特異性的(de)分子基(ji)礎(chu)。Fc段則主要(yao)介導(dao)抗體的(de)效(xiao)應功(gong)能(neng)，能夠(gou)與細(xi)胞表面(mian)的(de)Fc受體（FcR）發生(sheng)相(xiang)互作(zuo)用(yong)。

在(zai)流(liu)式(shi)實驗(yan)中(zhong)，熒光(guang)素偶(ou)聯抗(kang)體通過(guo)Fab段(duan)與細(xi)胞表面(mian)抗原的(de)特異性結合(he)，實現對特定細(xi)胞群(qun)體(ti)的(de)識別和定(ding)量分(fen)析(xi)。然(ran)而，當(dang)細(xi)胞表面(mian)表達(da)Fc受(shou)體(ti)時(shi)，抗體的(de)Fc段會與這(zhe)些(xie)受(shou)體發生(sheng)非(fei)特異性結合(he)，導(dao)致實驗(yan)出(chu)現假陽性結果。這(zhe)種(zhong)非(fei)特異性結合(he)具有種(zhong)屬和類(lei)別特異性，通常同種(zhong)屬、同類(lei)抗體的(de)Fc段能夠(gou)與相(xiang)應的(de)Fc受體發生(sheng)交(jiao)叉(cha)反應。

二、為什(shen)麽流(liu)式(shi)實驗(yan)需(xu)要(yao)進(jin)行(xing)抗體(ti)封閉(bi)處(chu)理(li)？

流(liu)式(shi)實驗(yan)中(zhong)的(de)抗體封(feng)閉處(chu)理(li)是(shi)確(que)保(bao)實驗(yan)結(jie)果準確(que)性的(de)關鍵(jian)步(bu)驟。其必(bi)要(yao)性主要(yao)體(ti)現在(zai)以(yi)下(xia)方面(mian)：首(shou)先(xian)，多種(zhong)免(mian)疫(yi)細(xi)胞表面(mian)都(dou)表達(da)不同類(lei)別的(de)Fc受體，如(ru)巨噬細(xi)胞、樹(shu)突狀(zhuang)細(xi)胞和B淋(lin)巴細(xi)胞等。這(zhe)些(xie)受(shou)體能(neng)夠(gou)與流(liu)式(shi)抗(kang)體(ti)的(de)Fc段發生(sheng)非(fei)特異性結合(he)，幹擾(rao)特異性信號(hao)的(de)檢測。

其次(ci)，非(fei)特異性結合(he)與特異性結合(he)在(zai)流(liu)式(shi)檢(jian)測中(zhong)表(biao)現出相(xiang)同的(de)信號特征，難以(yi)通過(guo)常規(gui)的(de)數據(ju)分(fen)析方法(fa)進(jin)行(xing)區分(fen)。這(zhe)種(zhong)幹擾(rao)會顯著影響(xiang)實驗(yan)結(jie)果的(de)可靠性，特別是(shi)在(zai)檢測低表達(da)抗(kang)原或(huo)分析稀有細(xi)胞群(qun)體(ti)時(shi)。因(yin)此(ci)，通(tong)過(guo)預(yu)先(xian)封閉Fc受(shou)體(ti)，可以(yi)有效(xiao)阻斷(duan)非(fei)特異性結合(he)，提高檢(jian)測的(de)特異性和準(zhun)確(que)性。

三、常用(yong)的(de)抗體封(feng)閉方法(fa)有哪些？

目(mu)前(qian)流(liu)式(shi)實驗(yan)中(zhong)常用(yong)的(de)封閉方法(fa)主要(yao)包(bao)括血清封(feng)閉法(fa)和特異性抗體(ti)封(feng)閉法(fa)。血(xue)清封(feng)閉法(fa)是(shi)通過(guo)添(tian)加過(guo)量(liang)同種(zhong)屬的(de)非(fei)特異性免疫(yi)球蛋白，競(jing)爭性結合(he)細(xi)胞表面(mian)的(de)Fc受體。這(zhe)種(zhong)方法(fa)成(cheng)本(ben)較低(di)，操作(zuo)簡(jian)便(bian)，適用(yong)於(yu)大多數常規(gui)流(liu)式(shi)檢(jian)測。

特異性抗體(ti)封(feng)閉法(fa)則采(cai)用(yong)抗CD16和抗(kang)CD32單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)，直接阻斷(duan)Fcγ受體(ti)與抗(kang)體Fc段的(de)結合(he)。這(zhe)種(zhong)方法(fa)具(ju)有更(geng)高的(de)封閉效(xiao)率(lv)和特異性，特別適用(yong)於(yu)表達(da)高水(shui)平(ping)Fc受(shou)體的(de)細(xi)胞或(huo)對檢測靈(ling)敏(min)度(du)要求較高的(de)實驗(yan)。兩(liang)種(zhong)方法(fa)各有優勢(shi)，研究(jiu)人(ren)員應根(gen)據實驗(yan)需(xu)求和樣(yang)本(ben)特性進(jin)行(xing)選(xuan)擇(ze)。

四(si)、如何(he)根據實驗(yan)樣(yang)本(ben)選(xuan)擇(ze)封閉策(ce)略(lve)？

不同組(zu)織來源(yuan)的(de)樣本(ben)其Fc受(shou)體的(de)表達(da)水(shui)平(ping)和組(zu)成存(cun)在(zai)顯著差異(yi)，這(zhe)直接影響(xiang)封(feng)閉(bi)策(ce)略(lve)的(de)選(xuan)擇(ze)。對於(yu)骨髓、脾(pi)臟(zang)和肝(gan)臟等(deng)組(zu)織中(zhong)的(de)巨噬細(xi)胞檢測，常規(gui)的(de)血清封(feng)閉通(tong)常能(neng)夠(gou)滿足(zu)實驗(yan)要(yao)求。然而(er)，在(zai)腸道(dao)組織巨噬細(xi)胞的(de)檢測中(zhong)，由(you)於(yu)該類(lei)細(xi)胞表達(da)高水(shui)平(ping)的(de)Fc受體，且(qie)受體(ti)亞型組成(cheng)特殊，血清封(feng)閉往(wang)往效(xiao)果不佳(jia)。

在(zai)實際研究(jiu)中(zhong)發現，腸道(dao)組織樣本(ben)使用(yong)大鼠(shu)血清封(feng)閉後，在(zai)BV421和BV510檢(jian)測通道(dao)仍出現明顯的(de)非(fei)特異性信號(hao)。這(zhe)種(zhong)現象(xiang)提示(shi)常規(gui)封(feng)閉(bi)方法(fa)可能無(wu)法(fa)充(chong)分阻斷(duan)該類(lei)樣本(ben)中(zhong)的(de)Fc受體活(huo)性。因(yin)此(ci)，對於(yu)特殊組織樣本(ben)，建議通(tong)過(guo)預(yu)實驗(yan)評估封(feng)閉效(xiao)果，優化(hua)封閉方案。

五、如(ru)何(he)建立(li)有效(xiao)的(de)封閉效(xiao)果評估體(ti)系？

建立(li)系統的(de)封閉效(xiao)果評估體(ti)系對保證(zheng)流(liu)式(shi)實驗(yan)質(zhi)量至關重要。首(shou)先(xian)，應設(she)置(zhi)未染(ran)色(se)對照(zhao)組，用(yong)於(yu)評估樣(yang)本(ben)的(de)自(zi)發熒光(guang)背景(jing)。其(qi)次(ci)，需(xu)要(yao)設(she)置(zhi)同型對照(zhao)，監測非(fei)特異性結合(he)水(shui)平(ping)。此(ci)外(wai)，使(shi)用(yong)熒光(guang)標(biao)記的(de)無(wu)關抗體作(zuo)為(wei)陰(yin)性對照(zhao)，可以(yi)更(geng)準(zhun)確(que)地(di)評估封(feng)閉效(xiao)果。

在(zai)實驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)，建議通(tong)過(guo)以(yi)下(xia)指標(biao)判斷(duan)封閉(bi)效(xiao)果：未染(ran)色(se)樣本(ben)在(zai)各檢測通道(dao)的(de)信號強度(du)應處(chu)於(yu)儀器(qi)檢(jian)測的(de)背景(jing)水(shui)平(ping)；同型對照(zhao)組的(de)信號強度(du)不應顯著高於(yu)背景(jing)；實驗(yan)組(zu)的(de)陽性群(qun)體(ti)會表(biao)現出明顯的(de)信號偏移(yi)。當(dang)這(zhe)些(xie)指標(biao)出(chu)現異常時(shi)，應考(kao)慮優(you)化(hua)封閉條件或(huo)更(geng)換(huan)封(feng)閉(bi)方法(fa)。

六、如何建立(li)標準(zhun)化(hua)的(de)封閉操作(zuo)流(liu)程(cheng)？

為確(que)保(bao)實驗(yan)結(jie)果的(de)可靠性和可重復性，建立(li)標準(zhun)化(hua)的(de)封閉操作(zuo)流(liu)程(cheng)十(shi)分必(bi)要。首(shou)先(xian)，應根(gen)據樣(yang)本(ben)類(lei)型和檢(jian)測目(mu)標(biao)制定明確(que)的(de)封閉方案選(xuan)擇(ze)標準。對於(yu)常規(gui)樣(yang)本(ben)，可優先選(xuan)擇(ze)血清封(feng)閉；對於(yu)特殊樣本(ben)或(huo)高靈(ling)敏(min)度(du)檢測，則推(tui)薦使(shi)用(yong)特異性抗體(ti)封(feng)閉。

其(qi)次(ci)，需(xu)要(yao)規(gui)範(fan)封閉操作(zuo)的(de)具體參數，包(bao)括封閉(bi)劑(ji)的(de)配制方法(fa)、使(shi)用(yong)濃(nong)度(du)、孵育時間(jian)和溫(wen)度(du)等。同時(shi)，建立(li)完善(shan)的(de)質(zhi)量控(kong)制體系，通過(guo)設(she)置(zhi)合(he)理(li)的(de)對照(zhao)樣本(ben)，系統評估每批實驗(yan)的(de)封閉效(xiao)果。最後，詳(xiang)細(xi)記錄封(feng)閉(bi)操作(zuo)的(de)關鍵(jian)參數，為(wei)實驗(yan)結(jie)果的(de)分析和問(wen)題排(pai)查(zha)提(ti)供(gong)依(yi)據。

通(tong)過(guo)系統化(hua)的(de)封閉策(ce)略(lve)和標(biao)準化(hua)的(de)操作(zuo)流(liu)程(cheng)，能夠(gou)顯著提高流(liu)式(shi)實驗(yan)數據(ju)的(de)質(zhi)量和可靠性，為科學(xue)研究(jiu)提(ti)供(gong)更(geng)加(jia)準(zhun)確(que)的(de)技術支持。

七(qi)、提(ti)供(gong)流(liu)式(shi)抗(kang)體(ti)的(de)廠(chang)商有哪些?

杭(hang)州(zhou)斯(si)達(da)特生(sheng)物(wu)科技(ji)有限公司自(zi)主研(yan)發的(de)"Alexa Fluor® 647標記的(de)小鼠(shu)抗人(ren)CD5抗體(ti)"（產(chan)品名(ming)：Alexa Fluor® 647 Mouse Anti-Human CD5 Antibody (S-576-35)，貨號(hao)：S0B0163），是(shi)壹款(kuan)具有高熒光(guang)強度(du)、信噪(zao)比及(ji)優(you)異(yi)光穩(wen)定(ding)性的(de)流(liu)式(shi)檢(jian)測試劑(ji)。該產(chan)品采(cai)用(yong)高特異性小鼠(shu)單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)，與明亮、穩(wen)定(ding)的(de)Alexa Fluor® 647熒光(guang)染(ran)料(liao)共價(jia)偶(ou)聯，在(zai)免疫(yi)分型、淋(lin)巴細(xi)胞功(gong)能(neng)研究(jiu)及(ji)腫瘤(liu)免疫(yi)微(wei)環境(jing)分(fen)析等(deng)流(liu)式(shi)細(xi)胞術中(zhong)具(ju)有關鍵(jian)應用(yong)價值(zhi)。

產(chan)品核心優(you)勢(shi)：

• 高熒光(guang)強度(du)與信(xin)噪比： 本(ben)品經(jing)優(you)化(hua)的(de)標記工藝(yi)確(que)保(bao)了(le)最高的(de)F/P（熒光(guang)素/蛋白）比值(zhi)，配(pei)合(he)Alexa Fluor® 647的(de)熒光(guang)特性，在(zai)流(liu)式(shi)檢(jian)測中(zhong)能(neng)提供(gong)明亮、特異的(de)信號，有效(xiao)區(qu)分陽性與陰(yin)性細(xi)胞群(qun)體(ti)，保(bao)證(zheng)數據(ju)的(de)精(jing)準性。

• 光穩(wen)定(ding)性與批次(ci)壹(yi)致(zhi)性： Alexa Fluor® 647染料(liao)具(ju)有優異的(de)光穩定(ding)性，可有效(xiao)降(jiang)低長時間上(shang)機檢(jian)測過(guo)程(cheng)中(zhong)的(de)信號衰(shuai)減(jian)。產(chan)品經(jing)過(guo)嚴(yan)格(ge)的(de)質(zhi)控，批間(jian)差異(yi)極小，為(wei)多色(se) panel設(she)計(ji)和大(da)規模(mo)研(yan)究(jiu)提(ti)供(gong)可靠保障。

適用(yong)於(yu)多類(lei)關鍵(jian)應用(yong)場景(jing)： 該產(chan)品是(shi)進(jin)行(xing)以(yi)下(xia)研究(jiu)的(de)理(li)想(xiang)工具(ju)：

• T細(xi)胞及B細(xi)胞亞群(qun)分(fen)析(xi)： 用(yong)於(yu)精(jing)確(que)鑒(jian)定和定(ding)量分(fen)析(xi)人(ren)體外(wai)周(zhou)血(xue)、淋(lin)巴結及脾(pi)臟(zang)等組織中(zhong)的(de)CD5+ T細(xi)胞和CD5+ B細(xi)胞（B-1a細(xi)胞）亞群(qun)

• 淋(lin)巴瘤(liu)與白血病(bing)免(mian)疫(yi)分型： 作(zuo)為(wei)關鍵(jian)標(biao)誌物(wu)，用(yong)於(yu)T細(xi)胞淋(lin)巴瘤(liu)、慢(man)性淋(lin)巴細(xi)胞白血病(bing)（CLL）及(ji)套細(xi)胞淋(lin)巴瘤(liu)（MCL）等的(de)診(zhen)斷(duan)與分(fen)型研究(jiu)

• 免(mian)疫(yi)激(ji)活(huo)狀(zhuang)態研(yan)究(jiu)： 用(yong)於(yu)監測T細(xi)胞在(zai)免疫(yi)應答過(guo)程(cheng)中(zhong)CD5表(biao)達(da)水(shui)平(ping)的(de)變化(hua)，研究(jiu)其(qi)與T細(xi)胞受體(ti)（TCR）信(xin)號強度(du)的(de)關聯

• 多色(se)流(liu)式(shi)Panel構(gou)建： 其出(chu)色(se)的(de)性能使(shi)其(qi)成為(wei)構(gou)建復雜(za)多色(se)流(liu)式(shi)抗(kang)體(ti)組(zu)合(he)的(de)理(li)想(xiang)選(xuan)擇(ze)，適用(yong)於(yu)深入的(de)免疫學(xue)研究(jiu)

專(zhuan)業技(ji)術(shu)支持： 我(wo)們(men)提(ti)供(gong)詳(xiang)盡(jin)的(de)產(chan)品技(ji)術(shu)資(zi)料(liao)，包(bao)括光譜(pu)特性、推薦使(shi)用(yong)濃(nong)度(du)、在(zai)不同樣(yang)本(ben)類(lei)型中(zhong)的(de)驗(yan)證(zheng)數據(ju)及(ji)在(zai)多色(se)Panel中(zhong)的(de)應用(yong)方案，全(quan)力協(xie)助(zhu)客(ke)戶(hu)獲(huo)得流(liu)式(shi)檢(jian)測結果。

杭(hang)州(zhou)斯(si)達(da)特生(sheng)物(wu)科技(ji)有限公司始終致力於(yu)為全(quan)球創新藥企與科研(yan)機構(gou)提(ti)供(gong)高質(zhi)量、高價(jia)值(zhi)的(de)生(sheng)物(wu)試劑(ji)與解決方案。如需(xu)了(le)解更(geng)多關於(yu)"Alexa Fluor® 647標記的(de)小鼠(shu)抗人(ren)CD5抗體(ti)"（貨(huo)號(hao)S0B0163）的(de)詳情或(huo)申(shen)請(qing)樣(yang)品(pin)測試，歡迎與我(wo)們(men)聯系。