熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)：如何在(zai)生(sheng)物(wu)醫學(xue)研(yan)究(jiu)中(zhong)實現(xian)精準檢測？

壹.什麽(me)是(shi)熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)的基本(ben)原理(li)？

免(mian)疫熒(ying)光技術作為發(fa)展最早(zao)的標記(ji)免(mian)疫技術之壹，在生(sheng)物(wu)醫學(xue)研(yan)究(jiu)領(ling)域(yu)具(ju)有(you)舉(ju)足輕(qing)重(zhong)的地位(wei)。該技術的核心原理(li)基(ji)於(yu)抗(kang)原(yuan)與抗(kang)體(ti)之(zhi)間的特(te)異(yi)性(xing)識別(bie)與(yu)結合，通(tong)過將熒(ying)光素(su)與抗(kang)體(ti)共(gong)價連接(jie)，形(xing)成熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)，從(cong)而實現(xian)對(dui)目標分子(zi)的可視(shi)化檢測。根(gen)據(ju)檢測(ce)目標的不同(tong)，該技術主(zhu)要(yao)分為(wei)兩種(zhong)形(xing)式(shi)：熒(ying)光抗(kang)體(ti)法(fa)，即(ji)利用熒(ying)光標記(ji)的抗(kang)體(ti)檢(jian)測相(xiang)應抗(kang)原(yuan)；熒(ying)光抗(kang)原(yuan)法(fa)，即(ji)使用熒(ying)光標記(ji)的抗(kang)原(yuan)檢測相(xiang)應抗(kang)體(ti)。

從(cong)制備(bei)流(liu)程來(lai)看，首(shou)先(xian)需(xu)要(yao)將特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)原(yuan)免(mian)疫動物，誘(you)導其產生(sheng)特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti)，然(ran)後(hou)從(cong)血(xue)清中(zhong)分離(li)純化免(mian)疫球蛋白，最後(hou)通(tong)過化學(xue)方法(fa)將(jiang)熒(ying)光探針(zhen)與抗(kang)體(ti)分子(zi)共價(jia)連接(jie)，制備(bei)成熒(ying)光標記(ji)抗(kang)體(ti)溶(rong)液。這種(zhong)熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)能(neng)夠與(yu)相(xiang)應的靶抗(kang)原(yuan)發(fa)生(sheng)特(te)異(yi)性(xing)結合，在(zai)特(te)定波(bo)長光照(zhao)下(xia)發(fa)射(she)熒(ying)光信號(hao)，從(cong)而實現(xian)對(dui)目標分子(zi)的定位(wei)與(yu)定量(liang)分析。

二(er).如何選(xuan)擇合適(shi)的熒(ying)光標記(ji)物(wu)？

成功(gong)的免(mian)疫熒(ying)光實驗(yan)在(zai)很大程(cheng)度上(shang)依(yi)賴(lai)於(yu)熒(ying)光標記(ji)物(wu)的合理(li)選(xuan)擇。目前常用的熒(ying)光染(ran)料主(zhu)要(yao)包(bao)括以(yi)下(xia)幾類(lei)：FITC（異硫(liu)氰(qing)酸(suan)熒(ying)光素(su)）、PE（藻紅(hong)蛋白）、APC（別(bie)藻(zao)藍(lan)蛋白）等(deng)。這些熒(ying)光染(ran)料在(zai)激發(fa)波(bo)長、發(fa)射(she)波(bo)長、熒(ying)光強(qiang)度(du)及(ji)光穩(wen)定性(xing)等(deng)方(fang)面各具(ju)特(te)色(se)。

根據(ju)相(xiang)對(dui)熒(ying)光強(qiang)度(du)，常見熒(ying)光染(ran)料從(cong)強(qiang)到(dao)弱(ruo)可排(pai)序為：PE、PE-Cy7、PE-Cy5、APC > APC-Cy7、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 700 > FITC、Pacific Blue、Alexa Fluor 488。其(qi)中(zhong)，FITC作(zuo)為經典的熒(ying)光素(su)，具(ju)有(you)穩(wen)定性(xing)好、偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)種(zhong)類(lei)豐富(fu)等(deng)優(you)點，特(te)別(bie)適(shi)用於(yu)流(liu)式細(xi)胞(bao)術的單色(se)分析。然(ran)而，其光淬(cui)滅(mie)較(jiao)快(kuai)的缺點(dian)也不(bu)容(rong)忽(hu)視(shi)，可通過添(tian)加(jia)抗(kang)淬(cui)滅劑(ji)來(lai)改(gai)善。PE則因其熒(ying)光亮度，在(zai)弱(ruo)表達(da)抗(kang)原(yuan)檢測中(zhong)表現(xian)出明(ming)顯(xian)優(you)勢。

三.熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)的制備(bei)方(fang)法(fa)有(you)哪些？

熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)的制備(bei)是(shi)壹個精細的化學(xue)修飾過程。以(yi)FITC標記(ji)為(wei)例(li)，在(zai)堿(jian)性(xing)反(fan)應條件(jian)下，FITC分子(zi)中(zhong)的異硫(liu)氰基（-N=C=S）與(yu)抗(kang)體(ti)蛋白分子(zi)中(zhong)的氨基(ji)（主(zhu)要(yao)來(lai)自賴(lai)氨酸(suan)殘基(ji)的ε-氨基(ji)）發(fa)生(sheng)親(qin)核反應，形(xing)成穩(wen)定的硫脲(niao)鍵(jian)，從(cong)而完成熒(ying)光標記(ji)。

對(dui)於(yu)PE、APC等(deng)蛋白類(lei)熒(ying)光素(su)的標記(ji)，通(tong)常采用SMCC、SPDP等(deng)異(yi)型(xing)雙(shuang)功(gong)能(neng)交(jiao)聯(lian)劑(ji)。SMCC的壹端(duan)N-羥基琥(hu)珀酰(xian)亞胺酯(zhi)（NHS ester）首(shou)先(xian)與(yu)熒(ying)光蛋白的氨基(ji)反應，另(ling)壹端(duan)的馬來(lai)酰(xian)亞胺基(ji)團則與(yu)經二(er)硫鍵(jian)還(hai)原產生(sheng)的抗(kang)體(ti)巰基(ji)結合，形(xing)成穩(wen)定的熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)。這種(zhong)方(fang)法(fa)能(neng)有效(xiao)保持抗(kang)體(ti)的生(sheng)物(wu)活(huo)性(xing)和熒(ying)光蛋白的光學(xue)特(te)性(xing)。

四.免(mian)疫熒(ying)光實驗(yan)的關鍵(jian)步(bu)驟(zhou)有(you)哪些？

完整的免(mian)疫熒(ying)光實驗(yan)包(bao)含壹系(xi)列嚴謹(jin)的操作(zuo)步(bu)驟(zhou)。首(shou)先(xian)是(shi)樣本(ben)制備(bei)，根(gen)據(ju)樣本(ben)類(lei)型(xing)可(ke)選(xuan)擇細胞(bao)爬(pa)片、冰凍(dong)切(qie)片或石(shi)蠟(la)切(qie)片。固定步(bu)驟(zhou)通(tong)常使用多(duo)聚甲醛(quan)等(deng)交(jiao)聯(lian)劑(ji)，以(yi)保(bao)持細胞(bao)形(xing)態(tai)和抗(kang)原(yuan)完整性(xing)。對(dui)於(yu)細胞(bao)內抗(kang)原(yuan)的檢測(ce)，還需要(yao)進行通透處(chu)理(li)，即(ji)在細(xi)胞(bao)膜(mo)上形(xing)成微孔以(yi)使抗(kang)體(ti)能(neng)夠進(jin)入(ru)細(xi)胞(bao)，通透時間通常控制在(zai)20分鐘(zhong)左右。

封(feng)閉是(shi)減(jian)少(shao)非特(te)異(yi)性(xing)結合的關鍵(jian)環(huan)節，常使用與(yu)二(er)抗(kang)來(lai)源壹致(zhi)的血(xue)清或1%-5%牛(niu)血(xue)清白蛋白（BSA）作(zuo)為封(feng)閉劑(ji)。壹抗(kang)孵(fu)育通(tong)常在4°C條件(jian)下進(jin)行12-16小(xiao)時，以(yi)確保(bao)充分結合。熒(ying)光二(er)抗(kang)孵(fu)育時應註(zhu)意(yi)選擇經過預吸(xi)附(fu)處(chu)理(li)的抗(kang)體(ti)，以(yi)降低交(jiao)叉(cha)反(fan)應風險(xian)。最後(hou)通(tong)過DAPI進行(xing)核染(ran)色(se)，並(bing)使用抗(kang)淬(cui)滅封(feng)片劑(ji)保護(hu)熒(ying)光信號(hao)。

五(wu). 如何評(ping)估(gu)熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)的質(zhi)量(liang)？

熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)的質(zhi)量(liang)評估是(shi)確保(bao)實驗(yan)結果可(ke)靠性(xing)的重(zhong)要(yao)環(huan)節。常用的評價(jia)指標包(bao)括熒(ying)光素(su)與蛋白質(zhi)的偶(ou)聯(lian)比率（F/P值）、抗(kang)體(ti)活(huo)性(xing)保(bao)持率等(deng)。F/P值反(fan)映(ying)了每個抗(kang)體(ti)分子(zi)上連(lian)接(jie)的熒(ying)光素(su)分子(zi)數，直接(jie)影(ying)響熒(ying)光信號(hao)的強(qiang)度(du)和背景(jing)水平(ping)。此(ci)外(wai)，還(hai)需要通過特(te)異(yi)性(xing)實驗(yan)驗(yan)證熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)的識別(bie)能(neng)力，通(tong)過穩(wen)定性(xing)實驗(yan)考(kao)察其保存(cun)性(xing)能(neng)。

在實際(ji)應用中(zhong)，還(hai)需要註(zhu)意(yi)熒(ying)光抗(kang)體(ti)的最適(shi)使用濃度，通(tong)常通過棋(qi)盤滴(di)定法(fa)確定。同(tong)時，應定期(qi)對(dui)熒(ying)光抗(kang)體(ti)進(jin)行性(xing)能(neng)驗(yan)證，確保(bao)其在(zai)使用過程中(zhong)保(bao)持穩(wen)定的檢測(ce)效能(neng)。

六.熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)在(zai)哪些領(ling)域(yu)具(ju)有(you)應用價(jia)值？

熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)在(zai)生(sheng)物(wu)醫學(xue)研(yan)究(jiu)的多(duo)個(ge)領(ling)域(yu)發(fa)揮(hui)著(zhe)重(zhong)要(yao)作用。在(zai)流(liu)式細(xi)胞(bao)術中(zhong)，熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)可(ke)實現(xian)細胞(bao)表面和細胞(bao)內抗(kang)原(yuan)的定量(liang)分析及細胞(bao)分選(xuan)。在(zai)免(mian)疫組織(zhi)化(hua)學(xue)中(zhong)，可(ke)通過多(duo)重(zhong)熒(ying)光標記(ji)同(tong)時分析多(duo)個(ge)靶分子(zi)，為組(zu)織(zhi)學(xue)研(yan)究(jiu)提供重(zhong)要(yao)工具(ju)。在(zai)活(huo)細(xi)胞(bao)成像(xiang)中(zhong)，熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)可(ke)用於(yu)實時追蹤目標分子(zi)的動態(tai)變化。

隨著技術的發(fa)展，熒(ying)光偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)在(zai)以(yi)下(xia)方面展現(xian)出新(xin)的應用前景：壹是(shi)與超(chao)高(gao)分辨(bian)率(lv)顯(xian)微鏡結合，突(tu)破光學(xue)衍(yan)射(she)極(ji)限，實現(xian)納米(mi)級精度的分子(zi)定位(wei)；二(er)是(shi)與微流(liu)控技術聯用，實現(xian)高(gao)通(tong)量(liang)的單細(xi)胞(bao)分析；三是(shi)開發(fa)新(xin)型(xing)近(jin)紅(hong)外(wai)熒(ying)光染(ran)料，拓展活(huo)體(ti)成像(xiang)的深度(du)與精度。

七(qi).提供單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)的廠商有(you)哪些?

杭州(zhou)斯(si)達(da)特(te)生(sheng)物(wu)科(ke)技有限公(gong)司(si)自主(zhu)研(yan)發(fa)的"Claudin 18.2重(zhong)組(zu)兔單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)（FITC標記(ji)）"（貨(huo)號：S0B0047），是(shi)壹款具(ju)有(you)高(gao)特(te)異(yi)性(xing)、高(gao)信噪(zao)比(bi)及優(you)異穩(wen)定性(xing)的熒(ying)光標記(ji)抗(kang)體(ti)產品(pin)。該(gai)產品(pin)采(cai)用重(zhong)組(zu)兔單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)技術制備(bei)，直接(jie)偶(ou)聯(lian)高(gao)純度FITC熒(ying)光素(su)，在胃癌(ai)、胰(yi)腺癌(ai)等(deng)實體(ti)瘤(liu)的Claudin 18.2靶點流(liu)式細(xi)胞(bao)分析、免(mian)疫組化及(ji)活(huo)細(xi)胞(bao)成像(xiang)等(deng)研(yan)究(jiu)中(zhong)具(ju)有(you)重(zhong)要(yao)應用價(jia)值。

產品(pin)核心優(you)勢：

• 高(gao)特(te)異(yi)性(xing)與(yu)低背景： 本(ben)品經流(liu)式細(xi)胞(bao)術、免(mian)疫熒(ying)光等(deng)多(duo)種(zhong)應用驗(yan)證，能(neng)夠精準識別(bie)Claudin 18.2抗(kang)原(yuan)，展現(xian)出特(te)異(yi)性(xing)。優(you)化的F/P（熒(ying)光素(su)/蛋白）標記(ji)比(bi)與純化工(gong)藝，有效(xiao)降低了非特(te)異(yi)性(xing)背(bei)景，確保(bao)檢測(ce)結果清(qing)晰可靠。

• 穩(wen)定性(xing)與(yu)壹致(zhi)性(xing)： 在(zai)嚴格(ge)的質(zhi)控標準(zhun)下(xia)，產品(pin)表現(xian)出優(you)異的光穩(wen)定性(xing)和批間壹致(zhi)性(xing)，確保(bao)不同(tong)實驗(yan)批次(ci)間結果的可靠性(xing)與(yu)可比性(xing)，為(wei)長期(qi)研究項(xiang)目提供穩(wen)定保(bao)障(zhang)。

適用於(yu)多(duo)類(lei)關鍵(jian)應用場(chang)景： 該(gai)產品(pin)是(shi)進行(xing)以(yi)下(xia)研究的理(li)想(xiang)工(gong)具(ju)：

• 腫(zhong)瘤(liu)細胞(bao)鑒定與(yu)分型(xing)： 用於(yu)胃癌(ai)、胰(yi)腺癌(ai)等(deng)細(xi)胞(bao)系(xi)或原代(dai)細胞(bao)中(zhong)Claudin 18.2陽(yang)性(xing)細(xi)胞(bao)的鑒定與(yu)定量(liang)分析

• 免(mian)疫治療研(yan)究與(yu)藥物篩(shai)選： 用於(yu)評估(gu)靶向(xiang)Claudin 18.2的抗(kang)體(ti)藥(yao)物、CAR-T細胞(bao)等(deng)免(mian)疫療法(fa)對(dui)靶細胞(bao)的結合與(yu)殺傷(shang)效(xiao)果(guo)

• 臨(lin)床(chuang)前模(mo)型(xing)分析： 用於(yu)病(bing)人來(lai)源異(yi)種(zhong)移植模(mo)型(xing)（PDX）或其他(ta)動(dong)物模(mo)型(xing)中(zhong)腫(zhong)瘤(liu)細胞(bao)的表型(xing)分析與追蹤

• 靶點表達(da)與(yu)定位(wei)研(yan)究： 用於(yu)研究(jiu)Claudin 18.2蛋白在(zai)細胞(bao)膜(mo)上的表達(da)水平(ping)、內化(hua)過程及(ji)亞細(xi)胞(bao)定位(wei)

專(zhuan)業技術支(zhi)持： 我們(men)提供詳盡的產品(pin)技術資料，包(bao)括完整的流(liu)式驗(yan)證數據(ju)、推(tui)薦實驗(yan)方(fang)案及專(zhuan)業化的應用支(zhi)持，全(quan)力(li)協(xie)助(zhu)客(ke)戶加(jia)速(su)在腫(zhong)瘤(liu)免(mian)疫與靶向(xiang)治(zhi)療(liao)領(ling)域(yu)的科(ke)研進程(cheng)。

杭(hang)州斯(si)達(da)特(te)生(sheng)物(wu)科(ke)技有限公(gong)司(si)始終致(zhi)力(li)於(yu)為全(quan)球(qiu)創新(xin)藥企(qi)與科(ke)研機構提供高(gao)質(zhi)量(liang)、高(gao)價(jia)值的生(sheng)物(wu)試劑(ji)與解(jie)決(jue)方案。如需了解更多(duo)關(guan)於(yu)"Claudin 18.2重(zhong)組(zu)兔單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)（FITC標記(ji)）"（貨(huo)號S0B0047）的詳情或申請樣品測(ce)試，歡(huan)迎與我們(men)聯(lian)系(xi)。

產品(pin)信息(xi)

杭(hang)州斯(si)達(da)特(te)誌(zhi)在(zai)為全(quan)球(qiu)生(sheng)命(ming)科(ke)學行業提供優(you)質(zhi)的抗(kang)體(ti)、蛋白、試劑(ji)盒等(deng)產品(pin)及(ji)研發(fa)服(fu)務(wu)。依托(tuo)多(duo)個(ge)開(kai)發(fa)平(ping)臺(tai)：重(zhong)組(zu)兔單抗(kang)、重(zhong)組(zu)鼠(shu)單抗(kang)、快(kuai)速(su)鼠(shu)單抗(kang)、重(zhong)組(zu)蛋白開(kai)發(fa)平(ping)臺(tai)（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）,已(yi)正(zheng)式通(tong)過歐盟(meng)98/79/EC認證、ISO9001認證、ISO13485。

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