如(ru)何選(xuan)擇(ze)您的內(nei)參抗體？

免(mian)疫印(yin)跡（Western blot, WB）是(shi)分子生(sheng)物(wu)學(xue)中(zhong)檢(jian)測復(fu)雜(za)生(sheng)物提(ti)取(qu)物(wu)中(zhong)特(te)定(ding)蛋(dan)白(bai)質存在的常用方法之壹。WB必須(xu)控制(zhi)上樣(yang)量以(yi)確保(bao)目(mu)標蛋(dan)白(bai)變(bian)化具有可(ke)比(bi)性，通(tong)常選(xuan)擇(ze)在所(suo)有(you)組織中(zhong)普(pu)遍(bian)分布的(de)具(ju)有相對(dui)恒定(ding)量(liang)的蛋(dan)白(bai)質作(zuo)為內(nei)參（Loading control）。

為何要(yao)選(xuan)用內(nei)參

在Western Blotting中使用內(nei)參就(jiu)是(shi)在試(shi)驗中另(ling)外(wai)用內(nei)參對(dui)應的(de)抗體檢(jian)測內(nei)參蛋(dan)白(bai)。內(nei)參就(jiu)是(shi)內(nei)部(bu)參照(zhao)，壹般是指管家基(ji)因編碼表達(da)的(de)蛋(dan)白(bai)，它們在各個組織和(he)細胞(bao)中(zhong)的(de)表達(da)相對(dui)恒定(ding)，在檢測蛋(dan)白(bai)的表達(da)水(shui)平(ping)變(bian)化時(shi)常用它來(lai)做參照(zhao)。

如何(he)選(xuan)擇(ze)內(nei)參抗體

1.樣(yang)本(ben)種屬來(lai)源

 選(xuan)擇(ze)內(nei)參首先要(yao)考(kao)慮(lv)的就(jiu)是實驗樣(yang)本(ben)來(lai)源於什(shen)麽(me)物種。哺乳(ru)動(dong)物的組織或(huo)者細胞(bao)樣(yang)本(ben)，通(tong)常選(xuan)擇(ze)β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Na+/K+-ATPase, Histone H3 等(deng)。植(zhi)物(wu)來(lai)源實驗樣(yang)本(ben)，則(ze)可(ke)以(yi)選(xuan)擇(ze)Plant actin、Rubisco等(deng)。其(qi)他(ta)來(lai)源樣(yang)本(ben)研究較(jiao)少(shao)，所(suo)以(yi)就應(ying)該參照(zhao)文(wen)獻(xian)報(bao)導(dao)，選(xuan)擇(ze)合適(shi)的(de)蛋(dan)白(bai)作(zuo)為內(nei)參。

2.目(mu)的蛋(dan)白(bai)分子量(liang)

選(xuan)擇(ze)內(nei)參抗體時(shi)，應該(gai)考慮(lv)目(mu)的蛋(dan)白(bai)分子量(liang)的(de)大小。通(tong)常應該(gai)保(bao)證(zheng)目(mu)的蛋(dan)白(bai)與(yu)內(nei)參蛋(dan)白(bai)分子量(liang)相差(cha)5KD以(yi)上。比(bi)如檢(jian)測目(mu)的蛋(dan)白(bai)分子量(liang)為45KD，此(ci)時(shi)不適(shi)宜(yi)選(xuan)擇(ze)β-actin（42KD）作(zuo)為內(nei)參，可(ke)以(yi)考慮(lv)選(xuan)擇(ze)GAPDH（36KD）作(zuo)為內(nei)參。

3.目(mu)的蛋(dan)白(bai)表達(da)部(bu)位(wei)

就壹般的蛋(dan)白(bai)檢測來(lai)說，β-actin、β-Tubulin抗體等(deng)就可以(yi)了(le)，而針(zhen)對(dui)於核蛋(dan)白(bai)的定(ding)量(liang)，特別(bie)是樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)就是核蛋(dan)白(bai)時(shi)，選(xuan)擇(ze)恰當(dang)的(de)核蛋(dan)白(bai)內(nei)參則(ze)更(geng)能體(ti)現(xian)內(nei)部(bu)參照(zhao)的價(jia)值。常用的核內(nei)參抗體有(you)Lamin A、Lamin B、Histone H3，除此(ci)之外，其(qi)它常(chang)見(jian)的(de)核蛋(dan)白(bai)內(nei)參還(hai)有(you)PCNA、K70、K80等，在壹些(xie)文(wen)獻(xian)報(bao)道中(zhong)，Erk2、TATA binding protein(TBP)以(yi)及(ji)c-Jun、c-Fos等(deng)都(dou)有使(shi)用。而對(dui)於膜(mo)蛋(dan)白(bai)檢測，常(chang)用的內(nei)參抗體為Na,K ATPase。對(dui)於線粒體蛋(dan)白(bai)的檢測，常(chang)用VDAC1和(he)COX IV作(zuo)為內(nei)參抗體。內(nei)參的(de)選(xuan)擇(ze)需(xu)要(yao)考(kao)慮(lv)實際(ji)的試(shi)驗環境(jing)，比(bi)如某(mou)些(xie)細胞(bao)中(zhong)，由(you)於組織缺氧(yang)、糖(tang)尿病等因素(su)會(hui)導致(zhi)GAPDH的(de)表達(da)增高，不適(shi)合做內(nei)參。比(bi)如在在雕(diao)亡(wang)實驗時(shi)，Lamin等也(ye)不(bu)適(shi)合作(zuo)為內(nei)參。因此(ci)設計實驗方案(an)的(de)時(shi)候應該(gai)考(kao)慮(lv)這(zhe)些(xie)因素(su)並(bing)查詢相應(ying)文(wen)獻(xian)，在實驗過(guo)程(cheng)中也(ye)應(ying)該註(zhu)意(yi)如果內(nei)參表達(da)出(chu)現(xian)異常，應(ying)考慮(lv)這(zhe)方(fang)面(mian)因素(su)。

斯(si)達(da)特(te)內(nei)參抗體

如(ru)何選(xuan)擇(ze)您的內(nei)參抗體

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