免疫(yi)微(wei)環(huan)境解(jie)析(xi)的“遠(yuan)紅外(wai)精準(zhun)定(ding)位器“-杭州斯(si)達(da)特(te)生(sheng)物(wu)科技有限公(gong)司

Alexa Fluor 647-Labeled B7-H3/CD276 Fc Chimera 是壹種(zhong)面(mian)向高維度、高復雜(za)度(du)腫瘤(liu)免疫(yi)研(yan)究的(de)檢(jian)測(ce)與功能(neng)分(fen)析(xi)探針(zhen)。它(ta)在前(qian)代FITC標記(ji)版本的(de)基礎上，進(jin)行了關(guan)鍵(jian)的光(guang)譜性能(neng)升(sheng)級，旨在解決在解析復雜(za)免疫(yi)微(wei)環(huan)境時最(zui)核心(xin)的技(ji)術(shu)瓶頸------多(duo)色信(xin)號(hao)串擾。該(gai)探針(zhen)通過(guo)將(jiang)B7-H3的(de)靶向識(shi)別(bie)能(neng)力(li)與高性(xing)能(neng)遠(yuan)紅外(wai)熒光(guang)染(ran)料Alexa Fluor 647及(ji)多(duo)功能(neng)Fc Chimera平臺(tai)相(xiang)結(jie)合(he)，為科研人員提供(gong)了(le)壹(yi)個能(neng)在超高參數流式分(fen)析(xi)、多(duo)重(zhong)組(zu)織(zhi)成(cheng)像及(ji)動(dong)態功能(neng)研(yan)究中，對B7-H3進(jin)行高保(bao)真(zhen)、獨立檢(jian)測(ce)的"遠(yuan)紅外(wai)精準(zhun)定(ding)位器"，是深入(ru)研究(jiu)B7-H3在免疫(yi)調(tiao)節與腫瘤(liu)進(jin)展中時空動(dong)態的利器。

壹(yi)、概(gai)述(shu)：光(guang)譜優化(hua)與平臺(tai)化(hua)設(she)計(ji)

該(gai)蛋白是B7-H3檢測(ce)工具系(xi)列(lie)中的(de)光(guang)譜優化(hua)版本，其設(she)計核心(xin)是追(zhui)求(qiu)在多(duo)參數復雜(za)體(ti)系(xi)中的(de)信號(hao)純凈(jing)度(du)與檢測(ce)自(zi)由(you)度(du)。

B7-H3/CD276胞(bao)外(wai)域(yu)靶向模塊(kuai)

核心部分(fen)為人B7-H3蛋白的(de)胞(bao)外(wai)結(jie)構(gou)域，功能(neng)保(bao)持(chi)不變，負責(ze)高(gao)特異(yi)性識(shi)別(bie)細(xi)胞(bao)表面及(ji)可(ke)溶(rong)性B7-H3抗(kang)原，確(que)保(bao)生(sheng)物學(xue)靶(ba)向的準確(que)性。

Fc Chimera結(jie)構(gou)

保(bao)留的(de)B7-H3-Fc嵌合(he)體(ti)結(jie)構(gou)，繼續發(fa)揮其平臺(tai)化(hua)優(you)勢：

信號(hao)自(zi)由(you)度(du)：Fc標簽(qian)允(yun)許(xu)用(yong)戶(hu)"解耦"B7-H3檢(jian)測(ce)與特定(ding)熒光(guang)通道的(de)綁定。當(dang)AF647通道因(yin)實驗設計(ji)被(bei)占(zhan)用(yong)時，可(ke)輕(qing)易(yi)通過(guo)更換不(bu)同熒光(guang)標記(ji)的二(er)抗(kang)，將B7-H3信號(hao)"遷(qian)移(yi)"至(zhi)任何其他可(ke)用(yong)通道（如(ru)PE-Cy7, BV785），這(zhe)為設計數十(shi)色的(de)超高維(wei)流式或成(cheng)像Panel提供(gong)了(le)靈(ling)活性(xing)。

穩定的功(gong)能(neng)操(cao)控基礎：為基於(yu)交(jiao)聯(lian)的(de)功(gong)能(neng)研(yan)究、競爭結(jie)合(he)實(shi)驗提供(gong)了(le)穩(wen)定可(ke)靠(kao)的(de)操(cao)作(zuo)接(jie)口。

Alexa Fluor 647熒光(guang)標記(ji)（核心升(sheng)級點(dian)）

將(jiang)FITC替換為Alexa Fluor 647，這(zhe)是壹次面向現代多(duo)色分(fen)析(xi)平臺(tai)的戰略性(xing)升(sheng)級。AF647在633 nm/640 nm激(ji)光(guang)激(ji)發(fa)下(xia)發(fa)射遠(yuan)紅外(wai)熒光(guang)，其革(ge)命性優(you)勢在於：

光(guang)譜隔離度：其發(fa)射光(guang)譜峰（~668 nm）與FITC、PE、PerCP-Cy5.5等(deng)常用(yong)染(ran)料的(de)發(fa)射峰(feng)幾乎分(fen)離(li)。在流式細胞(bao)術(shu)中，這(zhe)意味(wei)著極(ji)小的(de)熒光(guang)溢漏和更簡(jian)單、更準確(que)的補(bu)償(chang)矩(ju)陣(zhen)，確(que)保(bao)了(le)B7-H3信號的高(gao)保(bao)真(zhen)度和定量(liang)精確(que)性。

亮(liang)度(du)與光(guang)穩定性：比傳(chuan)統(tong)APC更亮，且(qie)更耐光(guang)漂白，能(neng)提(ti)供(gong)強而(er)持(chi)久的信(xin)號，適(shi)用(yong)於長(chang)時程(cheng)活(huo)細胞(bao)成(cheng)像、多(duo)次掃(sao)描的共(gong)聚(ju)焦成像及(ji)對(dui)弱(ruo)表達(da)樣本(ben)的(de)靈敏(min)檢測(ce)。

優異(yi)的組(zu)織(zhi)成(cheng)像性能(neng)：遠(yuan)紅光(guang)受組(zu)織(zhi)自(zi)發(fa)熒光(guang)幹擾最(zui)小，在厚組(zu)織(zhi)切(qie)片(pian)、類(lei)器官或原位腫瘤(liu)的(de)深層成像中，能(neng)獲(huo)得更優的(de)信噪(zao)比和(he)穿透(tou)深度。

設計(ji)哲(zhe)學(xue)

此探針(zhen)是應(ying)對(dui)"大(da)數據(ju)量免疫(yi)分(fen)析(xi)"挑戰的(de)專用(yong)解決(jue)方案(an)。B7-H3結(jie)構(gou)域是內容本(ben)身(shen)（目(mu)標信息(xi)）；Alexa Fluor 647是為這(zhe)壹重(zhong)要(yao)信息分(fen)配的獨立、高(gao)清、無(wu)幹擾的(de)專(zhuan)屬(shu)傳(chuan)輸(shu)頻(pin)道；而(er)Fc Chimera則是確(que)保(bao)這(zhe)壹信(xin)息能(neng)在任何"通訊網絡"（實(shi)驗平臺(tai)）中，以編碼和(he)輸(shu)出(chu)的(de)自(zi)適(shi)應(ying)協(xie)議(yi)。其目(mu)標是讓(rang)B7-H3的數據(ju)，在當今最(zui)復雜(za)的(de)多(duo)組(zu)學(xue)"數(shu)據(ju)洪(hong)流"中(zhong)，始終(zhong)能(neng)被(bei)清晰、無(wu)誤地(di)讀(du)取。

二(er)、核(he)心機制(zhi)：超高維(wei)背(bei)景(jing)下(xia)的純凈(jing)信(xin)號獲(huo)取

該探針(zhen)的(de)核心(xin)價值在於其能(neng)夠無(wu)縫(feng)、無(wu)損地(di)整合(he)到多(duo)參數分(fen)析(xi)流程(cheng)中(zhong)。

1. 解決(jue)超(chao)高(gao)維流(liu)式分(fen)析(xi)的通道沖(chong)突

解(jie)鎖30+色流(liu)式(shi)面(mian)板(ban)：在設計用於(yu)深度(du)解析(xi)腫(zhong)瘤(liu)浸潤免疫(yi)細(xi)胞或骨(gu)髓(sui)微(wei)環(huan)境的(de)超(chao)高維(wei)流式方案時，AF647通道因(yin)其幹凈的(de)光(guang)譜特性而(er)成為寶(bao)貴(gui)資源(yuan)。使(shi)用AF647-B7-H3，可(ke)以在不犧牲FITC、PE等(deng)核心(xin)通道用(yong)於其他關鍵(jian)標誌物(wu)的前(qian)提(ti)下(xia)，將B7-H3這(zhe)壹重(zhong)要(yao)參數嵌入(ru)，實現(xian)真正意(yi)義上(shang)的全(quan)譜(pu)分(fen)析(xi)。

實現精準(zhun)的(de)共(gong)表達(da)與排除(chu)分(fen)析(xi)：可(ke)以輕松且(qie)準(zhun)確(que)地(di)分(fen)析(xi)與B7-H3共表(biao)達(da)或相(xiang)互(hu)排(pai)斥(chi)的(de)其他分(fen)子(zi)，如(ru)PD-L1、HLA-DR、CD44等(deng)，精確(que)界定(ding)B7-H3+細(xi)胞(bao)群的免疫(yi)表(biao)型和(he)功(gong)能(neng)狀(zhuang)態，無(wu)信號(hao)補(bu)償(chang)糾(jiu)葛(ge)之(zhi)憂。

2. 提升(sheng)復雜(za)組(zu)織(zhi)空間成像的質(zhi)量(liang)

多(duo)重(zhong)免疫(yi)熒光(guang)/免疫(yi)組(zu)化(hua)的(de)核(he)心(xin)組(zu)分(fen)：在CODEX、PhenoCycler、MIBI-TOF等(deng)空間蛋白質(zhi)組(zu)學(xue)技(ji)術(shu)或常(chang)規(gui)多(duo)色熒光(guang)實驗中，AF647是關鍵的熒光(guang)通道之(zhi)壹(yi)。使(shi)用該探針(zhen)，可(ke)在同壹張(zhang)組(zu)織(zhi)切(qie)片(pian)上(shang)，原位同時觀(guan)察B7-H3在腫瘤(liu)細(xi)胞、腫瘤(liu)相(xiang)關(guan)巨(ju)噬(shi)細胞、癌癥相(xiang)關(guan)成纖維細(xi)胞(bao)及(ji)血(xue)管上的(de)表(biao)達(da)，並(bing)分(fen)析(xi)其與CD8+ T細胞(bao)、Tregs等(deng)的精確(que)空間關系(xi)。

三維(wei)組(zu)織(zhi)成(cheng)像：在對患者來源(yuan)的(de)類(lei)器(qi)官或組(zu)織(zhi)進(jin)行三維(wei)共(gong)聚(ju)焦成像時，AF647的遠(yuan)紅光(guang)能(neng)有效穿透(tou)更深層(ceng)結(jie)構(gou)，獲得更完(wan)整、清(qing)晰的Z軸(zhou)信息(xi)。

3. 動(dong)態功能(neng)研(yan)究的高質(zhi)量(liang)示蹤(zong)

長時程(cheng)活(huo)細胞(bao)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)成(cheng)像：其優(you)異(yi)的光(guang)穩定性使(shi)其非(fei)常適(shi)合(he)用於(yu)延(yan)時成像，觀(guan)察B7-H3在免疫(yi)突(tu)觸(chu)形(xing)成過(guo)程(cheng)中(zhong)的動(dong)態分(fen)布，或追(zhui)蹤(zong)表達(da)B7-H3的(de)細(xi)胞(bao)外囊泡(pao)的(de)轉(zhuan)移(yi)過(guo)程(cheng)。

高(gao)內涵(han)篩(shai)選：在基於(yu)圖(tu)像的高(gao)內(nei)涵藥物篩(shai)選中(zhong)，AF647標記(ji)能(neng)提(ti)供(gong)穩(wen)定(ding)、高對(dui)比度的信(xin)號，用(yong)於自(zi)動(dong)化(hua)分(fen)析(xi)藥物對(dui)B7-H3表(biao)達(da)或定(ding)位的影(ying)響。

三、下(xia)遊應(ying)用(yong)：賦(fu)能(neng)系(xi)統免疫(yi)學(xue)與精準(zhun)治(zhi)療(liao)

該探針(zhen)特(te)別適(shi)用(yong)於需(xu)要(yao)整合(he)多(duo)層次(ci)、多(duo)參數信息的研究(jiu)和轉(zhuan)化(hua)醫(yi)學(xue)領(ling)域。

1. 腫瘤(liu)免疫(yi)微(wei)環(huan)境的(de)系(xi)統級解析(xi)

高(gao)維流式(shi)細胞(bao)術(shu)深度(du)免疫(yi)圖(tu)譜繪制(zhi)：聯(lian)合(he)數(shu)十(shi)種(zhong)抗(kang)體(ti)，對(dui)腫(zhong)瘤(liu)浸潤免疫(yi)細(xi)胞進(jin)行無(wu)偏差的(de)全(quan)面(mian)分(fen)析(xi)。精確(que)鑒定B7-H3在不同細胞(bao)亞(ya)群(qun)（如(ru)髓(sui)系(xi)來源(yuan)抑(yi)制(zhi)細胞、M2型(xing)巨(ju)噬(shi)細胞、調節(jie)性(xing)樹(shu)突(tu)狀細(xi)胞(bao)）上(shang)的(de)表達(da)模式，並(bing)量化(hua)其與T細胞(bao)耗(hao)竭(jie)、功能(neng)障(zhang)礙(ai)的相(xiang)關(guan)性。

空間多(duo)組(zu)學(xue)驗證與發(fa)現：在獲得單細(xi)胞轉(zhuan)錄組(zu)數(shu)據(ju)並推(tui)斷(duan)出(chu)細(xi)胞間通信網絡後(hou)，利(li)用AF647-B7-H3進(jin)行空間蛋白驗證，在原位確(que)認推(tui)斷(duan)的(de)B7-H3介(jie)導的細胞-細(xi)胞(bao)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)，實(shi)現(xian)"計(ji)算預測(ce)"與"空間實證"的(de)閉(bi)環(huan)。

2. 靶向B7-H3療(liao)法的(de)生物(wu)標誌物(wu)與機制(zhi)研究

預測(ce)性生(sheng)物(wu)標誌物(wu)探索：利(li)用(yong)高維(wei)分(fen)析(xi)，不僅評(ping)估B7-H3的腫瘤(liu)表(biao)達(da)水平，更深入(ru)分(fen)析(xi)其表(biao)達(da)的(de)細(xi)胞(bao)來源(yuan)異(yi)質(zhi)性(xing)、空間分(fen)布模式，探索更能(neng)預測(ce)B7-H3靶向抗體、ADC或CAR-T療(liao)效的復合(he)生(sheng)物(wu)標誌物(wu)。

聯(lian)合(he)治(zhi)療(liao)策略的(de)機(ji)制(zhi)闡明：在臨床前(qian)模型中(zhong)，研究免疫(yi)檢(jian)查點(dian)抑(yi)制(zhi)劑(ji)、化(hua)療(liao)或放(fang)療(liao)如(ru)何(he)影響腫(zhong)瘤(liu)和(he)免疫(yi)細(xi)胞上(shang)B7-H3的(de)表達(da)動(dong)態，闡明其與治(zhi)療(liao)敏感性(xing)或耐(nai)藥性的(de)關(guan)聯(lian)，為合理(li)設(she)計聯(lian)合(he)療(liao)法提(ti)供(gong)依(yi)據(ju)。

ADC藥物開(kai)發(fa)與評(ping)估：精準(zhun)量(liang)化(hua)不(bu)同腫瘤(liu)模型表(biao)面B7-H3的抗原密度(du)與均壹(yi)性(xing)，並利用(yong)探針(zhen)的(de)功能(neng)性(xing)，評(ping)估藥物內(nei)吞(tun)效率(lv)及(ji)其對(dui)抗原表達(da)的(de)反(fan)馴調節(jie)。

3. 免疫(yi)相(xiang)關(guan)疾(ji)病機制(zhi)研究

自(zi)身(shen)免疫(yi)與炎癥性疾(ji)病：在類風濕關(guan)節炎滑(hua)膜(mo)、多(duo)發(fa)性硬(ying)化(hua)癥(zheng)腦(nao)組(zu)織(zhi)等(deng)病變部位，利用(yong)多(duo)色空間成像技術(shu)，高精度(du)解(jie)析(xi)B7-H3在炎癥細胞、基質(zhi)細(xi)胞(bao)及(ji)組(zu)織(zhi)修(xiu)復細(xi)胞(bao)中(zhong)的(de)表達(da)譜(pu)，深(shen)入(ru)研究(jiu)其在疾(ji)病不同階段(duan)可(ke)能(neng)扮演(yan)的雙(shuang)重(zhong)角色(se)。

四(si)、未來展望(wang)：整合(he)前(qian)沿觀(guan)測(ce)與智能(neng)分(fen)析(xi)

作(zuo)為面向未來的(de)工(gong)具，其發(fa)展將與生命(ming)科(ke)學(xue)領(ling)域的觀(guan)測(ce)和計(ji)算範(fan)式(shi)深度(du)融合。

與光(guang)譜流式和質(zhi)譜(pu)流(liu)式(shi)的(de)無(wu)縫(feng)融合(he)

光(guang)譜流式細胞術(shu)：AF647是光(guang)譜流式中進(jin)行高維(wei)數(shu)據(ju)解混時非常(chang)穩定的(de)信(xin)號(hao)源，能(neng)確(que)保(bao)B7-H3信(xin)息在數十(shi)個參數中準確(que)解析(xi)。

成(cheng)像質(zhi)譜(pu)流(liu)式(shi)技(ji)術(shu)：基於(yu)同壹結(jie)合(he)域(yu)開發(fa)金(jin)屬(shu)標簽(qian)偶聯(lian)版本，用(yong)於無(wu)任何光(guang)譜限制(zhi)的成像質(zhi)譜(pu)流(liu)式(shi)分(fen)析(xi)，實現40+蛋(dan)白(bai)標誌物(wu)的組(zu)織(zhi)原位同步檢測(ce)，將B7-H3的(de)表(biao)達(da)置(zhi)於(yu)超高(gao)通量的(de)空間分(fen)子(zi)背景(jing)中(zhong)。

活體成(cheng)像與診療(liao)壹體(ti)化(hua)探索

利(li)用(yong)AviTag（如(ru)有）或新(xin)的工(gong)程(cheng)化(hua)策(ce)略，開(kai)發(fa)標記(ji)近(jin)紅外(wai)二(er)區(qu)染(ran)料的(de)B7-H3探針(zhen)，用(yong)於小動(dong)物活體深部腫瘤(liu)成(cheng)像，實時監測(ce)B7-H3靶向藥物的(de)分(fen)布、療(liao)效及(ji)腫(zhong)瘤(liu)微(wei)環(huan)境演(yan)變。

人工智能(neng)驅(qu)動(dong)的圖(tu)像分(fen)析(xi)與模型構(gou)建(jian)

利用(yong)AF647-B7-H3產(chan)生(sheng)的(de)高(gao)質(zhi)量(liang)、高(gao)特(te)異(yi)性多(duo)通道組(zu)織(zhi)圖(tu)像，訓練(lian)人(ren)工智能(neng)模型（如(ru)深(shen)度學(xue)習(xi)神(shen)經網絡），自(zi)動(dong)識(shi)別(bie)和(he)量(liang)化(hua)不(bu)同細胞(bao)類(lei)型上(shang)的B7-H3表達(da)、計(ji)算空間共定位指數(shu)、識(shi)別(bie)特(te)定(ding)的空間生態位，並將(jiang)這(zhe)些(xie)特(te)征(zheng)與患者(zhe)基因(yin)組(zu)數(shu)據(ju)、臨床(chuang)結(jie)局(ju)關(guan)聯(lian)，構(gou)建(jian)數字(zi)病理(li)預後(hou)預測(ce)模型。

單(dan)細胞多(duo)模態組(zu)學(xue)分(fen)析(xi)的樞(shu)紐

在單細胞水平，將(jiang)基於(yu)相(xiang)同表位的DNA條(tiao)形(xing)碼標記(ji)抗體用於CITE-seq，獲取轉(zhuan)錄組(zu)與表面(mian)蛋(dan)白組(zu)（含(han)B7-H3）信息；同時，利用(yong)AF647探針(zhen)進(jin)行流式(shi)分(fen)選(xuan)或驗證，實(shi)現多(duo)維數(shu)據(ju)的交(jiao)叉驗證與深度(du)整合(he)。

總(zong)結(jie)

Alexa Fluor 647-Labeled B7-H3 Fc Chimera 代表(biao)了(le)腫瘤(liu)免疫(yi)研(yan)究工(gong)具從"功(gong)能(neng)實(shi)現"向"系(xi)統集(ji)成"演(yan)進(jin)的關(guan)鍵壹步。它通過(guo)精心(xin)的(de)光(guang)譜工程(cheng)設(she)計，將(jiang)關(guan)鍵(jian)的免疫(yi)檢(jian)查點(dian)分(fen)子(zi)B7-H3"安置(zhi)"在現代多(duo)色分(fen)析(xi)技術(shu)版圖(tu)中幹擾最(zui)小的(de)遠(yuan)紅外(wai)頻道上(shang)。這(zhe)使(shi)得研究人員能(neng)夠在探索最(zui)復雜(za)的(de)生物(wu)系(xi)統------如(ru)充(chong)滿(man)異(yi)質(zhi)性(xing)的(de)腫(zhong)瘤(liu)免疫(yi)微(wei)環(huan)境------時，依然(ran)能(neng)從(cong)容、精準(zhun)地(di)獲取(qu)B7-H3的全(quan)維(wei)度(du)信(xin)息。從繪制(zhi)高維免疫(yi)細(xi)胞的(de)功(gong)能(neng)圖(tu)譜，到解(jie)密聯(lian)合(he)療(liao)法的(de)協同機制(zhi)；從在空間原位驗證計(ji)算模型的(de)預測(ce)，到賦(fu)能(neng)人(ren)工智能(neng)驅(qu)動(dong)的病理(li)診(zhen)斷(duan)，這(zhe)個"遠(yuan)紅外(wai)精準(zhun)定(ding)位器"正成(cheng)為連(lian)接(jie)基礎免疫(yi)發(fa)現與臨床(chuang)精準(zhun)免疫(yi)治(zhi)療(liao)實踐(jian)中，高(gao)性能(neng)數(shu)據(ju)采集終端(duan)。未來，它(ta)將(jiang)繼(ji)續作(zuo)為基準(zhun)工具，推(tui)動(dong)多(duo)組(zu)學(xue)技(ji)術(shu)在腫瘤(liu)免疫(yi)學(xue)中(zhong)的深度融(rong)合(he)，為發(fa)現新(xin)的治(zhi)療(liao)靶點(dian)、優(you)化(hua)現(xian)有療(liao)法並(bing)最(zui)終實(shi)現個(ge)體化(hua)癌癥治(zhi)療(liao)，提供(gong)更強大(da)、更精準(zhun)的(de)觀(guan)測(ce)能(neng)力(li)。

Alexa Fluor 647-Labeled B7-H3/CD276 Fc Chimera：免疫(yi)微(wei)環(huan)境解(jie)析(xi)的"遠(yuan)紅外(wai)精準(zhun)定(ding)位器"-南(nan)京優愛(ai)(UA BIO), 重(zhong)組(zu)蛋(dan)白專家