選擇合適的(de)偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)是實驗研(yan)究成功(gong)的(de)關(guan)鍵(jian)步(bu)驟，其性能直接影響檢(jian)測(ce)靈(ling)敏(min)度(du)、特異性和結(jie)果(guo)可(ke)靠(kao)性。
壹(yi)、明確實驗(yan)需求與目(mu)標
實驗類(lei)型(xing)
流(liu)式(shi)細胞術（Flow Cytometry）：需選擇熒(ying)光標記的(de)抗(kang)體(ti)，且熒(ying)光素需與儀器激(ji)光器匹(pi)配。
免(mian)疫(yi)熒(ying)光（IF/ICC）：需考慮熒(ying)光素的(de)亮度、光穩定(ding)性及是(shi)否(fou)適(shi)合共聚焦(jiao)顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)。
Western Blot（WB）：常(chang)用(yong)HRP或(huo)AP標記的(de)二(er)抗(kang)，需與底物(wu)兼(jian)容。
ELISA：根(gen)據(ju)檢(jian)測(ce)類型(xing)選擇酶(mei)標（HRP/AP）或(huo)生(sheng)物素標記的(de)抗(kang)體(ti)。
免疫組化(hua)（IHC）：需選擇組織(zhi)穿(chuan)透(tou)性好的(de)標記物。
檢(jian)測(ce)目標
壹(yi)抗(kang)vs二(er)抗(kang)：偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)通常(chang)為(wei)二(er)抗(kang)（標記抗(kang)體(ti)），需與壹(yi)抗(kang)的(de)宿主(zhu)種屬(shu)和亞(ya)型(xing)匹(pi)配(pei)。
多(duo)色(se)實(shi)驗(yan)：需選擇熒(ying)光素光譜(pu)不(bu)重(zhong)疊(die)的(de)抗(kang)體(ti)組合。
二、核心選擇參(can)數(shu)
標記物類型(xing)
熒(ying)光標記：
FITC：綠色(se)熒(ying)光，亮度高(gao)但易(yi)光漂白(bai)，適(shi)合短(duan)期(qi)觀(guan)察(cha)。
PE：橙(cheng)紅色(se)熒(ying)光，亮度高(gao)，常(chang)用(yong)於(yu)流式(shi)細胞術。
Alexa Fluor系列(lie)：光穩定(ding)性強(qiang)，光譜(pu)範圍廣(guang)。
APC/PerCP：遠紅外熒(ying)光，適(shi)合多色(se)流(liu)式(shi)實驗(yan)。
酶(mei)標記：
HRP（辣根(gen)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)）：靈(ling)敏(min)度(du)高(gao)，常(chang)用(yong)於(yu)WB和ELISA。
AP（堿性磷(lin)酸(suan)酶(mei)）：穩定(ding)性好，適(shi)合堿性條件(jian)下(xia)的(de)檢(jian)測(ce)。
生(sheng)物素標記：需與鏈(lian)黴親(qin)和素系統聯用(yong)，放(fang)大(da)信(xin)號(hao)，適(shi)用(yong)於(yu)低豐(feng)度抗(kang)原(yuan)檢(jian)測(ce)。
抗(kang)體(ti)特異性
驗證數據(ju)：查(zha)看(kan)供(gong)應(ying)商提(ti)供(gong)的(de)WB、IHC或(huo)流式(shi)圖譜，確認抗(kang)體(ti)能特異性識別(bie)目(mu)標抗(kang)原(yuan)。
交叉反(fan)應：避免(mian)與宿主(zhu)種屬(shu)或(huo)其他蛋白(bai)發(fa)生(sheng)非(fei)特異性結(jie)合。
克隆(long)號(hao)：優(you)先選擇經(jing)過(guo)多篇(pian)文獻驗證的(de)克隆(long)號(hao)。
效價(jia)與(yu)濃度
效價(jia)（Titer）：高(gao)效價(jia)抗(kang)體(ti)可(ke)減(jian)少用(yong)量，降低成本(ben)。供(gong)應(ying)商通常(chang)提(ti)供(gong)推薦稀釋(shi)比(bi)例。
濃度：偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)的(de)濃度需與實(shi)驗(yan)體(ti)系匹配，過(guo)高(gao)可(ke)能(neng)導致非(fei)特異性背景(jing)，過(guo)低則信(xin)號(hao)弱。
宿主(zhu)種屬(shu)與亞(ya)型(xing)
二(er)抗(kang)宿主(zhu)：需與壹(yi)抗(kang)的(de)宿主(zhu)種屬(shu)壹(yi)致。
亞(ya)型(xing)匹(pi)配(pei)：對(dui)於(yu)多克隆(long)抗(kang)體(ti)，需確認二抗(kang)能(neng)識別所有(you)IgG亞型(xing)。
三、成本(ben)與實(shi)驗規模(mo)
單價(jia)與(yu)用(yong)量
偶(ou)聯(lian)抗(kang)體(ti)價(jia)格(ge)通常(chang)高(gao)於(yu)未標記抗(kang)體(ti)，需根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)規模(mo)選擇合適規格(ge)。
替(ti)代(dai)方(fang)案(an)
若預算(suan)有(you)限(xian)，可(ke)購(gou)買(mai)未標記抗(kang)體(ti)並自行標記（需具備(bei)標記技(ji)術條件）。
使用(yong)生(sheng)物素-鏈(lian)黴親(qin)和素系統放大(da)信(xin)號(hao)，減(jian)少抗(kang)體(ti)用(yong)量。
四(si)、常(chang)見(jian)誤區與避坑(keng)指南
忽略熒(ying)光素兼(jian)容性：流式(shi)實驗(yan)中，若儀器無(wu)405nm激(ji)光，則不(bu)能使(shi)用(yong)Pacific Blue標記的(de)抗(kang)體(ti)。
未驗(yan)證交叉反(fan)應：抗(kang)人抗(kang)體(ti)可(ke)能(neng)識別非(fei)人靈(ling)長類(lei)動物(wu)，但不(bu)壹(yi)定(ding)適用(yong)於(yu)小(xiao)鼠或(huo)大(da)鼠。
過(guo)度依賴(lai)供(gong)應(ying)商數據(ju)：需在自身(shen)實驗體(ti)系中驗證抗(kang)體(ti)性能。
忽視儲(chu)存條件：熒(ying)光標記抗(kang)體(ti)需避光保存，酶(mei)標記抗(kang)體(ti)需避免(mian)反(fan)復凍(dong)融。
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