優化(hua)流(liu)式細(xi)胞分析的(de)關鍵(jian)——FcR阻斷劑

Fc Receptor

流(liu)式細(xi)胞術通過(guo)熒光標記抗(kang)體特(te)異性(xing)的(de)識(shi)別(bie)細胞或細(xi)胞(bao)亞(ya)群(qun)，從(cong)而在(zai)流(liu)式細(xi)胞儀中(zhong)進行檢測(ce)和區(qu)分。標記抗(kang)體的(de)Fab段進行特異(yi)性(xing)識(shi)別(bie)，但所有抗(kang)體中(zhong)高度(du)保(bao)守(shou)區(qu)Fc段也(ye)會被部分細(xi)胞(bao)識(shi)別(bie)，識(shi)別(bie)免疫球蛋(dan)白(bai)（Ig）Fc段的(de)蛋(dan)白(bai)即(ji)為Fc受(shou)體（Fc Receptor）。

Fc受(shou)體存(cun)在於(yu)多種免(mian)疫細胞(bao)的(de)表面(mian)，包括單(dan)核細胞、巨(ju)噬(shi)細(xi)胞(bao)和DC細胞、嗜酸性(xing)粒(li)細(xi)胞(bao)，嗜堿(jian)性(xing)粒(li)細(xi)胞(bao)、中(zhong)性(xing)粒(li)細(xi)胞(bao)、髓系細(xi)胞、B細(xi)胞表面、NK細(xi)胞等(deng)等(deng)，在免(mian)疫細胞(bao)表(biao)面(mian)發揮(hui)多種關(guan)鍵功能：

吞(tun)噬(shi)作(zuo)用(yong)：免(mian)疫細胞(bao)如(ru)巨(ju)噬細(xi)胞和中(zhong)性(xing)粒(li)細(xi)胞(bao)通過(guo)Fc受(shou)體識(shi)別(bie)並吞(tun)噬(shi)被抗(kang)體包(bao)被的(de)微生(sheng)物，這(zhe)是壹(yi)種重(zhong)要的(de)先(xian)天免(mian)疫防(fang)禦(yu)機(ji)制(zhi)。

溶(rong)酶體降(jiang)解：吞(tun)噬(shi)後(hou)的(de)免疫復合(he)物被運(yun)輸到溶(rong)酶體內，溶酶體中(zhong)的(de)酶類能夠降(jiang)解病原體(ti)和其他異物，完(wan)成病原體(ti)的(de)清(qing)除過(guo)程(cheng)。

細(xi)胞(bao)毒(du)作用(yong)：自然殺傷(shang)細(xi)胞(bao)等(deng)通過(guo)Fc受(shou)體識(shi)別(bie)被抗(kang)體標記的(de)細胞(bao)，釋放(fang)細(xi)胞毒(du)性(xing)顆(ke)粒(li)。

細(xi)胞因子和趨化(hua)因子的(de)分泌(mi)：激(ji)活的(de)免疫細胞(bao)能(neng)夠(gou)分泌(mi)細(xi)胞因子和趨化(hua)因子，有助於調(tiao)節(jie)免疫反應(ying)，吸(xi)引(yin)其(qi)他免疫細胞(bao)到感(gan)染(ran)或(huo)炎癥部(bu)位(wei)。

圖1 免疫細胞(bao)表(biao)面(mian)FC受體(ti)的(de)功能

FcR根(gen)據它(ta)們(men)結合的(de)免疫球蛋(dan)白(bai)類型被分為(wei)不(bu)同(tong)的(de)類別(bie)：IgG的(de)Fc受體(ti)（FcγR）、IgE的(de)Fc受體(ti)（FcεR、IgA的(de)Fc受體(ti)（FcαR）、IgM的(de)Fc受體(ti)（FcμR）和IgD的(de)Fc受體(ti)（FcδR）。

日(ri)常實(shi)驗中(zhong)使用(yong)的(de)多是IgG類型的(de)單(dan)抗(kang)，其Fc受(shou)體（FcγR）根(gen)據親(qin)和力強弱(ruo)可(ke)分為(wei)三(san)個亞家(jia)族(zu)：FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32）和FcγRIII（CD16）。

圖2 FcγR 家族(zu)和表達模(mo)式(shi)

FcR阻(zu)斷

在流(liu)式實(shi)驗中(zhong)細胞(bao)表(biao)面(mian)表達的(de)多種FcγR易(yi)與(yu)抗(kang)體FC段(duan)結合(he)，出而出現(xian)非特異(yi)性(xing)染(ran)色(se)，導致分析中(zhong)容易(yi)出現(xian)高(gao)背景(jing)或甚(shen)至(zhi)假(jia)陽(yang)性(xing)信(xin)號(hao)。為(wei)獲得(de)正(zheng)確的(de)陽(yang)性(xing)細(xi)胞(bao)群(qun)，可(ke)以(yi)先(xian)加(jia)入封(feng)閉試(shi)劑(ji)孵(fu)育細(xi)胞，占據結(jie)合(he)位(wei)點阻(zu)斷(duan)Fc受體與(yu)抗(kang)體結(jie)合，降(jiang)低檢(jian)測背(bei)景(jing)獲得(de)更(geng)準(zhun)確的(de)結果。

常見(jian)的(de)封閉試(shi)劑(ji)主(zhu)要(yao)有以(yi)下(xia)幾(ji)種：

血(xue)清(qing)或血(xue)清(qing)隨純化(hua)的(de)IgG

抗(kang)CD16/32抗(kang)體

抗(kang)CD16/32抗(kang)體

S-RMab®FcR阻(zu)斷劑(ji)

斯(si)達特(te)上(shang)新Human FcR Blocking Reagent，親(qin)和力強，聯(lian)同(tong)已(yi)上(shang)新的(de)Mouse Fc Receptor Blocker，提供FcR阻斷(duan)產品。

產(chan)品名稱(cheng)：Human FcR Blocking Reagent           貨號：S0F0002           阻斷用(yong)量：1.0μg per 2.5x10^5 cells in 100ul volume

流(liu)式分析人(ren)PBMC標記兔單(dan)克隆(long)IgG同(tong)型對(dui)照抗(kang)體，孵(fu)育30分鐘(zhong)後(hou)在冰(bing)上(shang)PBS（右側(ce)）與(yu)Human FcR Blocking Reagent按1/100（1 µg，2.5×10^5細胞(bao)在(zai)100 µL中(zhong)）稀釋度(du)處(chu)理(li)以(yi)阻斷(duan)Fc受體(ti)及非特異(yi)性(xing)蛋(dan)白(bai)結合(he)，並與(yu)未(wei)標記對(dui)照組（未(wei)與(yu)壹(yi)抗(kang)和二抗(kang)孵育的(de)細胞(bao)）（藍(lan)色(se)）進行比(bi)較。

流(liu)式細(xi)胞術分析THP-1細(xi)胞(bao)標記兔單(dan)克隆(long)IgG同(tong)型對(dui)照抗(kang)體，在(zai)冰(bing)上(shang)PBS（黑(hei)色(se)）或人(ren)類FcR阻(zu)斷試(shi)劑(ji)按1/100稀釋度(du)（1 µg，2.5×10^5細(xi)胞在(zai)100 µL中(zhong)）（紅色(se)）孵育30分鐘(zhong)處(chu)理(li)，以(yi)阻斷(duan)Fc受體(ti)及非特異(yi)性(xing)蛋(dan)白(bai)結合(he)，並與(yu)未(wei)標記對(dui)照組（未(wei)與(yu)壹(yi)抗(kang)和二抗(kang)孵育的(de)細胞(bao)）（藍(lan)色(se)）進行比(bi)較。