基(ji)因治療中重要的AAV抗(kang)體

腺相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)（AAV）具(ju)有(you)低(di)致病性(xing)、低免疫(yi)原(yuan)性、高基(ji)因(yin)遞(di)送(song)能(neng)力(li)，作為病(bing)毒載體(ti)廣(guang)泛用於(yu)基(ji)因治療領域(yu)。基(ji)於AAV載體(ti)的基因(yin)治療也是美(mei)國(guo)和(he)歐(ou)洲(zhou)獲批(pi)的體內(nei)基(ji)因療法。

圖1 AAV治療

AAV載體有(you)多種優(you)勢(shi)，如(ru)：野生型(xing)的AAV未引(yin)發(fa)任何(he)疾(ji)病；AAV在多種細胞(bao)中(zhong)都能實現有(you)效(xiao)載(zai)荷的長期(qi)表(biao)達；AAV不(bu)具有(you)強(qiang)免疫(yi)原(yuan)性等。目(mu)前超70%基因遞(di)送(song)藥(yao)物(wu)均采(cai)用AAV載(zai)體(ti)遞(di)送(song)，尤(you)其(qi)適用於(yu)肝(gan)臟、視網膜和中(zhong)樞(shu)神(shen)經系統(tong)等(deng)組織(zhi)。

AAV2

根據病毒衣(yi)殼(ke)蛋(dan)白(bai)的表面(mian)抗(kang)原差異進行分類，已(yi)發(fa)現數(shu)十(shi)種不(bu)同(tong)衣(yi)殼(ke)蛋(dan)白(bai)的AAV，不同(tong)的AAV具有(you)不(bu)同(tong)的衣(yi)殼(ke)蛋(dan)白(bai)空(kong)間結構、序列(lie)和組織(zhi)特異性。這些血(xue)清型在體(ti)內產生(sheng)不(bu)同(tong)的抗(kang)血(xue)清類型。

圖2 AAV三(san)維(wei)結構, BCRF PDB ID: 1LP3

其中AAV2是最常見的血(xue)清型，與其他(ta)血(xue)清型的氨(an)基酸(suan)序(xu)列(lie)相(xiang)似性(xing)較高，目(mu)前幾乎所(suo)有(you)的重組AAV病毒載體(ti)的核心(xin)骨(gu)架(jia)都是來(lai)源於AAV2亞(ya)型，所(suo)以AAV2也是最早(zao)被廣(guang)泛研(yan)究的AAV血(xue)清型。

AAV2是壹種小型的非包(bao)膜病毒(du)，直(zhi)徑(jing)約(yue)為20-25nm，屬(shu)於(yu)I型(xing)嗜肺(fei)病毒(du)。主(zhu)要由(you)壹(yi)個外(wai)殼(ke)構成(cheng)，這個外(wai)殼(ke)由(you)60個亞(ya)基組建而(er)成(cheng)，主(zhu)要包(bao)含三(san)種多肽(tai)VP1、VP2和(he)VP3，共同(tong)組成(cheng)了(le)壹個能(neng)夠保(bao)護(hu)其(qi)內(nei)部遺(yi)傳物(wu)質(zhi)的外殼(ke)結構，。

AAV2能夠有(you)效(xiao)轉(zhuan)導多種細胞(bao)類型，低(di)免疫(yi)原(yuan)性使得(de)在(zai)體內表達可(ke)以持(chi)續(xu)較長時(shi)間，高轉(zhuan)導效(xiao)率(lv)和廣(guang)泛的組織(zhi)特異性使(shi)其成(cheng)為傳遞(di)修復基(ji)因至(zhi)特定細胞(bao)的理想(xiang)載(zai)體(ti)，已(yi)超(chao)過200項(xiang)AAV相(xiang)關(guan)的臨床(chuang)試(shi)驗(yan)正(zheng)在進行或(huo)即(ji)將完成(cheng)。如(ru)：重組人(ren)5型(xing)腺(xian)相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)註射液(ye)（H101）是中國目(mu)前獲得(de)批(pi)準的溶瘤病毒的藥物(wu)，主(zhu)要用於(yu)治療無法切(qie)除(chu)或(huo)術(shu)後復(fu)發轉(zhuan)移(yi)的鼻(bi)咽(yan)癌(ai)患者；腺相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)載(zai)體(ti)OBP-301通過瘤內註射，聯合免疫(yi)治療食(shi)管癌(ai)，已(yi)進入(ru)Ⅰ期(qi)臨(lin)床(chuang)階(jie)段(duan)；腺相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)載(zai)體(ti)AdVince通過瘤內註射治療神(shen)經內(nei)分泌(mi)瘤，目(mu)前處(chu)於Ⅰ/Ⅱa期臨(lin)床(chuang)試(shi)驗(yan)階(jie)段(duan)。

AAV NAbs

在AAV基(ji)因治療中，抗(kang)AAV中和(he)抗(kang)體（Neutralizing Antibodys, NAbs）與AAV結合，影響(xiang)病(bing)毒(du)與靶(ba)細胞(bao)表(biao)面(mian)受(shou)體結合(he)，導致顯著降(jiang)低(di)載體(ti)的轉(zhuan)導效(xiao)率(lv)和有(you)效(xiao)性(xing)，直(zhi)接影(ying)響基因(yin)治療的效果(guo)。另(ling)外AAV與NAbs形(xing)成(cheng)的復合(he)物(wu)也可(ke)能引(yin)起(qi)壹系列(lie)的免疫(yi)反(fan)應，影響基因(yin)治療的安全性。

NAbs可(ke)以在(zai)自(zi)然(ran)感染AAV後形(xing)成(cheng)，也可(ke)能在(zai)AAV載(zai)體給(gei)藥(yao)後產(chan)生。AAV Nabs可(ke)能來(lai)源於患者體內預(yu)存(cun)的AAV抗(kang)體，來(lai)自自(zi)然(ran)感染導致的免疫(yi)記(ji)憶(yi)或(huo)是交(jiao)叉(cha)反應性，大約有(you)30-60%的人(ren)群(qun)體(ti)內(nei)有(you)預(yu)存(cun)的中和(he)抗(kang)體。亦(yi)或(huo)是在高劑(ji)量(liang)或(huo)者系統(tong)性(xing)給(gei)藥(yao)時(shi)，AAV載(zai)體在體內可(ke)能引(yin)發(fa)宿主(zhu)的免疫(yi)反(fan)應產生Nabs。

篩查AAV NAbs是壹個重要步驟(zhou)，目(mu)前用於(yu)檢測AAV Nabs的主(zhu)要方法是基於細胞(bao)的檢測和(he)配(pei)體結(jie)合測(ce)定法（間接(jie)ELISA或(huo)者化學(xue)發(fa)光法），通(tong)過這些方法對預存(cun)抗(kang)體的檢測、中(zhong)和(he)試(shi)驗(yan)和(he)總抗(kang)體測(ce)定都是確保(bao)基(ji)因(yin)治療有(you)效(xiao)性(xing)和安全性的關(guan)鍵(jian)環(huan)節。

目(mu)前已(yi)有(you)多項(xiang)監管指南(nan)將篩查AAV抗(kang)體納(na)入(ru)到(dao)伴隨(sui)診(zhen)斷(duan)檢測項(xiang)目(mu)中，CDx的上市(shi)申(shen)請(qing)和(he)AAV基(ji)因(yin)治療的生物(wu)制劑(ji)許(xu)可(ke)申(shen)請(qing)應協調壹(yi)致。AAV抗(kang)體檢測在(zai)系統(tong)性(xing)基因治療中至(zhi)關(guan)重要，它不(bu)僅影響治療效果(guo)，也是確保(bao)患者安全的關(guan)鍵(jian)因(yin)素。

S-RMab®單(dan)克隆抗(kang)體

斯(si)達特(te)開發AAV(intact particle)抗(kang)體可(ke)識別特定(ding)AAV病(bing)毒顆粒(li)構象表位(wei)，用於(yu)定(ding)量病(bing)毒物(wu)理(li)滴(di)度(du)和病(bing)毒(du)免疫(yi)原(yuan)性分析（ADA）。在(zai)免疫(yi)原(yuan)性分析中(zhong)，斯達特(te)AAV抗(kang)體可(ke)用於(yu)抗(kang)衣(yi)殼(ke)蛋(dan)白(bai)抗(kang)體及(ji)中和(he)抗(kang)體的檢測，作為陽(yang)性對(dui)照(zhao)或(huo)在ADA分析中(zhong)制備標準曲(qu)線。

產(chan)品(pin)名(ming)稱(cheng)：AAV2 (intact particle) Recombinant Mouse mAb (S-R435)       貨(huo)號：S0B0771

AAV2 (intact particle) Recombinant Mouse mAb (S-R435) to be tested were diluted a series of gradients (from 500ng/ml, 2 fold, 9 points) ,and each gradient was co-incubated with AAV2 virus, the mixture was infected with 293T cells after incubation, and RLU luminescence value was detected.